苟文军 刘思源 覃 冬

泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway，UPP)是细胞内蛋白质选择性降解的重要途径。在真核生物中，绝大多数蛋白质是通过UPP进行降解的[1]。Smad7是 TGF-β/Smad信号转导通路中的重要转导分子，主要受UPP的降解调节。因此，本实验通过观察泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对链-脲佐菌素(streptozotocin，STZ)诱导的糖尿病(diabetes mellitus，DM)大鼠模型视网膜上Smad7表达的影响，探讨Smad7的表达与糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)之间的关系，从而为DR发病机制的研究与DR的防治提供新的研究方向。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物与分组 取健康的雄性Wistar大鼠60只，体质量180～200 g，SPF级，购自重庆腾鑫生物技术有限公司。将Wistar大鼠适应性喂养7 d，应用随机数字表法将动物随机分为3组:正常对照组、DM+MG132组和DM组，每组大鼠各20只。

1.1.2 主要试剂与仪器 STZ(美国 Sigma公司)、MG132(美国Sigma公司)、兔抗大鼠Smad7单克隆抗体(北京中杉公司)、DAB显色试剂盒(北京中杉公司)、Accu-CHEK型血糖仪及其配套血糖试纸(瑞士罗氏公司);眼科显微剪、显微镊，前房穿刺刀(美国Alcon公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型建立与标本制作 临用前将STZ溶解于0.1 mmol·L－1柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液中(pH 4.5)，制成10 g·L－1STZ 液。建模前将 60 只Wistar大鼠禁食12 h(禁食不禁饮)，DM组与DM+MG132组一次性腹腔注射50 mg·kg－1STZ液，正常对照组一次性给予等体积的柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液腹腔注射。72 h后尾静脉测血糖，空腹血糖≥16.7 mmol·L－1者视为造模成功。自DM模型建立后第3天起，DM+MG132组每天给予MG132 DMSO液(0.1 mg·kg－1)腹腔注射，DM 组和正常对照组每天给予0.1 mg·kg－1DMSO液腹腔注射。每隔两周测一次血糖及体质量，分别于造模后8周和12周时测血糖和体质量后并处死各组大鼠。完整取出大鼠的左右眼球，并制成眼杯[2]。……