李 印 李 拓 宋秀胜 李家璋 吴青松 李红艳 贺 涛

CD157是一种相对分子质量为42 000～45 000的细胞膜表面分子，通过糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidyl inositol，GPI)锚着于细胞膜上，称为GPI锚定蛋白，它们没有跨膜区与胞内部分，不能直接与胞内发生联系。但用特异性抗体与这些结构上不同的膜蛋白或膜糖鞘脂结合后，却能诱导细胞内信号转导和细胞产生应答反应，介导细胞的黏附和迁移及参与免疫反应的调节[1]。虽然CD157没有跨膜结构，但具有受体功能，向细胞内传递信号，这个功能可用抗CD157的单克隆抗体作为天然配体进行实验[2]。视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞是增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)的主要细胞成分，RPE细胞的迁移、黏附和增生是PVR形成的最重要的机制。许多眼科疾病的发生都与RPE细胞的迁移、黏附有关。为研究RPE细胞的迁移和黏附作用是否与CD157有关，我们采用免疫组织化学、Western-blot、RT-PCR检测ARPE-19细胞中CD157的表达，并用CD157单克隆抗体刺激细胞，检测其对细胞的迁移和黏附功能的影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 ARPE-19细胞系、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)(武汉大学细胞库，CCTCC)，DMEM/F12培养基、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、胰蛋白酶(美国Gibco公司)，Trizol试剂(美国Invitrogen公司)，逆转录试剂盒(加拿大Fermentas公司)，PCR扩增试剂(加拿大Fermentas公司)，RIPA细胞裂解液(北京普利莱基因技术公司)，CD157鼠抗人单克隆抗体(SY/11B5)(美国eBioscience公司)，βactin鼠抗(武汉博士德生物工程有限公司)，人纤连蛋白(fibronectin，FN)(以色列，Prospec公司)，山羊抗鼠SABC试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色 将无菌的盖玻片置入培养板中，将ARPE-19细胞接种于盖玻片上，置于37℃、含体积分数5%CO2培养箱培养过夜。……