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复方南星止痛膏的顶空气相色谱指纹图谱研究

2012-11-08李永辉王佩香陈俊赵丽丁岗萧伟

中国现代中药 2012年7期
关键词:南星樟脑顶空

李永辉,王佩香,陈俊,赵丽,丁岗,萧伟*

(1.江苏康缘药业股份有限公司,江苏 连云港 222001;2.海南医学院药学院,海南 海口 571101)

中药工业

复方南星止痛膏的顶空气相色谱指纹图谱研究

李永辉1,2,王佩香1,陈俊1,赵丽1,丁岗1,萧伟1*

(1.江苏康缘药业股份有限公司,江苏 连云港 222001;2.海南医学院药学院,海南 海口 571101)

目的:建立复方南星止痛膏的顶空气相指纹图谱,全面评价其质量。方法:采用气相色谱法,色谱柱:HP-5MS(30 m×0.25mm,0.25μm),载气为氮气,流速:1mL·min-1,分流比:5∶1,FID检测器,程序升温,顶空进样。并对10批复方南星止痛膏挥发性成分指纹图谱进行相似度计算。结果:10批复方南星止痛膏指纹图谱中有6个共有峰,各峰分离度良好,样品间相似度均大于0.95。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于复方南星止痛膏的质量评价。

复方南星止痛膏;气相色谱;指纹图谱

复方南星止痛膏是由肉桂、丁香、冰片、樟脑等12味药材组成的中药复方制剂,具有散寒除湿,活血止痛的功效。用于治疗寒湿瘀阻所致的关节疼痛,肿胀,活动不利,遇寒加重等[1]。该制剂为江苏南星药业有限责任公司产品(国药准字Z10970019),目前复方南星止痛膏质量标准仅有含量测定研究,未对其制剂进行指纹图谱研究[2]。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴定手段,它是建立在中药化学成分系统研究的基础上,主要用于评价中药制剂质量的真实性、优良性和稳定性,以指纹图谱作为中药制剂的质量控制方法,已成为目前行业的共识[3-5]。考虑到制剂中含有大量的挥发性药材,采用气相色谱进行了复方南星止痛膏的指纹图谱研究,该方法简便、准确、专属性强、重现性好,能有效地控制该制剂的质量。

1 仪器与试剂

Agilent6890系列GC色谱仪,含7694E顶空进样系统、柱温箱、FID检测器等单元。安捷伦HP-5MS柱(30 m×0.25mm,0.25μm),樟脑对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110747-200507,供含量测定用);复方南星止痛膏(江苏南星药业有限责任公司,批号100416,100417,100418,100419,100420,100421,100422,100423,100424,100425,分别编号S1~S10)。甲醇、甲基硅油均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

顶空条件:样品加热温度120℃,定量环温度135℃,传输线温度150℃;样品加热时间40 min,加压时间0.2 min,定量环填充时间0.5 min,定量环平衡时间0.05 min,进样时间1.0 min。

色谱条件:程序升温起始温度为100℃,保持3 min,以2℃·min-1的速率升至130℃,以30℃·min-1的速率升至230℃,保持2 min。流速:1mL·min-1;分流比:5∶1;FID检测;记录时间:20 min。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取樟脑对照品适量,加甲醇制成浓度为1 mg·mL-1的溶液,即得参照物储备液。精密吸取80μL参照物储备液,置20mL顶空进样瓶中,加入200 mg甲基硅油,压盖密封,80℃加热10 min,超声混匀,作为参照物样品。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取复方南星止痛膏5 mg,置20mL顶空进样瓶中,加入200mg甲基硅油,压盖密封,80℃加热10 min,超声混匀,作为供试样品。

2.4 测定方法

分别精密量取对照品溶液和供试品溶液适量,注入气相色谱仪,按上述色谱条件操作,考察80 min内供试品溶液的色谱分离情况,记录20 min色谱图。

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度试验 按照2.3供试品溶液的制备项下方法制备样品,按照2.1项下色谱条件连续进样5针,记录色谱图,以樟脑为参照峰,计算共有峰相对保留时间及相对面积,结果各峰相对保留时间RSD均小于0.03%;相对峰面积 RSD均小于3.72%,表明仪器精密度符合要求。

2.5.2 稳定性试验 取批号为100416的复方南星止痛膏,按2.3供试品溶液的制备项下方法制备供试品,分别于0,2,4,6,8 h进样考察其稳定性,以樟脑为参照峰,计算共有峰相对保留时间及相对面积,结果各峰相对保留时间RSD均小于0.09%;相对峰面积RSD均小于3.55%,结果表明供试品样品在8 h内稳定。

2.5.3 重复性试验 取批号为100416的复方南星止痛膏,按2.3供试品溶液的制备项下方法平行制备6份供试品溶液,按照2.1项下色谱条件分别进行分析,以樟脑为参照峰,计算共有峰相对保留时间及相对面积,结果各峰相对保留时间RSD均小于0.12%;相对峰面积RSD均小于4.24%,结果表明本试验方法的重复性符合要求。

2.6 指纹图谱的建立[6]

2.6.1 共有指纹峰的标定 采用相对保留时间标定共有指纹峰,以图谱中樟脑色谱峰为参照峰(S),将各色谱峰保留时间与同一图谱中参照峰的保留时间比较,其比值为各色谱峰的相对保留时间,计算10批样品指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间,见表1。其中6个色谱峰为各样品所共有,故标定它们为共有指纹峰。

表1 共有指纹峰的保留时间

2.6.2 共有峰的相对峰面积 以图谱中樟脑峰(2号峰)为参照峰,将各色谱峰峰面积与同一图谱参照峰的峰面积比较,其比值为各色谱峰的相对峰面积。见表2。

2.6.3 指纹图谱相似度评价 采用中国药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价》软件(2004年 A版)进行相似度计算。设置批号为100416的样品图谱为参照图谱,对照图谱生成方法采用中位数法,时间窗宽度为0.10,多点校正后自动匹配,生成对照指纹图谱(S),见图1~2。结果10批制剂的相似度均在0.99以上,表明建立的指纹图谱的技术稳定、重现性好。见表3。

2.6.4 主要GC色谱峰的确认 运用对照品对比和GC-MS的分析方法,对2,3,4号主要色谱峰进行了指认,结果显示3个化合物分别为樟脑、异龙脑和龙脑,其质谱碎片分别为樟脑(152,108,95,81,69,55),异龙脑(136,121,110,96,82,67,55)和龙脑(139,121,110,96,91,67,55)。

图1 10批复方南星止痛膏GC指纹图谱

图2 复方南星止痛膏的对照指纹图谱

表3 相似度计算结果

3 结果与讨论

3.1 色谱柱的选择

在实验过程中考察了HP-INWAX色谱柱和HP-5MS柱,HP-INWAX柱对龙脑和异龙脑的分析效果较好,但是其他色谱峰数小于HP-5MS柱。综合考虑,所以本文选择了HP-5MS柱进行指纹图谱研究。

3.2 顶空溶剂的选择

本实验尝试了正丁醇、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、水分别作为复方南星止痛膏的溶剂,结果正丁醇、二甲基亚砜和N,N-二甲基甲酰胺的溶剂峰较高,水为溶剂的信号峰较小。而采用高沸点的甲基硅油为溶剂,可以有效减少溶剂峰的气化,同时随着温度上升,样品峰的峰面积也增加较多,各组分能够良好分离,色谱图包含的色谱峰信息多。

3.3 顶空加热温度和时间的选择

确定甲基硅油为顶空溶剂后,我们对加热温度分别选择了100,120,140,160℃,加热时间选择20,40,60 min进行了考察。结果显示加热温度超过120℃时,峰面积增加较少,但仪器精密度偏差大于10%,因此我们选择了120℃作为加热温度。加热时间考察结果显示,加热40 min后,峰面积不再有显著的增加,所以选择加热时间为40 min。

3.4 其他

10批复方南星止痛膏的相似度均超过0.95,说明复方南星止痛膏的生产工艺较稳定。该方法可以用于复方南星止痛膏的质量控制。然而在指纹图谱相似度计算中使用的是相对峰面积比值,相似性代表的是图谱中对应峰比例的一致性,基本不受整体浓度的影响,因此评价药材、中间体和制剂的质量时,还应该参考质量标准中的含量测定项。

[1]谈莹莹.复方南星止痛膏外治膝骨关节炎寒湿痹阻证的临床示范性研究[D].南京:南京中医药大学,2010.

[2]殷书梅,王宓,林新艳,等.UPLC法测定复方南星止痛膏中马兜铃酸A的含量[J].南京中医药大学学报,2009,25(5):396-397.

[3]刘小花,沈孝丽,石义凯,等.参橘止咳滴丸的指纹图谱研究[J].现代中药研究与实践,2012,26(1):75-78.

[4]颜月园,萧 伟,吴云,等.散结镇痛胶囊中皂苷类成分的指纹图谱研究[J].中草药,2012,43(3):496-500.

[5]陈华,李岚,陈小荣,等.健胃消食片HPLC指纹图谱研究[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(5):79-82.

[6]国家食品药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)[S].2000.

Fingerprint Chromatogram Analysis of Fufang Nanxing Zhitong Gao by Headspace GC

LIYong-hui,WANG Pei-xiang,CHEN Jun,ZHAO Li,DING Gang,XIAOWei
(1.Jangsu Kanion Pharmaceutical Co.,Ltd.,Lianyungang 222001,China;2.School of Pharmacy,Hainan Medical University,Haikou 571101,China)

Objective:To establish a headspace GC fingerprint chromatogram for analysis volatile compounds of Fufang Nanxing Zhitong Gao,and evaluated its quality.MethodsThe sample was conducted by GC with HP-5 column(30 m×0.25mm,0.25μm).The carrier gas was N2at the flow rate of 1.0mL·min-1.Split ratio was 5∶1.The detection was FID.Ten batches of Fufang Nanxing Zhitong Gao was calculated to their similarity.Results:Six main peakswere clearly separated in 20 min.The similarity of ten batches was over 0.95.Conclusion:The headspace GC fingerprint chromatogram is successfully used on analysis and quality control of Fufang Nanxing Zhitong Gao.

Fufang Nanxing Zhitong Gao;GC;Fingerprint

* [通讯作者]萧伟,E-mail:kanionxw2010@126.com

2012-05-18)

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