李清华 徐萍 王静 姜景平 陈令全

PPARγ激动剂对急性坏死性胰腺炎大鼠p38MAPK活化的影响

李清华 徐萍 王静 姜景平 陈令全

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在炎症反应中通过调节炎症因子表达起重要作用[1]。我们前期研究发现，过氧化酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorsγ，PPARγ)激动剂吡格列酮对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠血清促炎细胞因子有抑制作用。本研究探讨p38 MAPK在ANP发生、发展中的作用及吡格列酮对p38 MAPK的影响，进一步了解PPARγ激动剂的抗炎机制。

一、材料与方法

1．实验动物及分组：54只雄性SD大鼠，清洁级，体重160～200 g，购自南昌大学医学院动物实验中心。按数字表法随机分成对照组、ANP组及吡格列酮干预组(干预组)，每组18只。采用胰管逆行注射50 g/L牛磺胆酸钠(Sigma公司)1 μl/g体重的方法制备ANP模型。对照组开腹后只翻动胰腺并以钝器轻划胰腺3次后关腹。干预组在术后立即腹腔内注射10% DMSO-吡格列酮溶液50 mg/kg体重。术后3、6、12 h分批经腹主动脉放血处死大鼠, 观察胰腺大体病理改变，并取胰头部组织，部分用40 g/L中性甲醛固定，部分置液氮保存。

2．胰腺病理检查：胰腺大体病理观察采用Hughes等[2]标准，从水肿、出血、脂肪坏死3个方面进行评分。福尔马林固定标本常规石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下每张切片随机选择5个高倍视野观察胰腺组织病理学变化，并依据Schmidt等[3]标准从水肿、感染、出血和坏死4个方面评分。

3．磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)检测：取冻存标本100 mg，常规提取总蛋白，BCA蛋白浓度分析试剂盒测定蛋白浓度，应用蛋白质印迹法检测p-p38MAPK。p-p38MAPK单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgM购自Santa cruz公司。……