陈江 郭晓钟 李宏宇 邵晓东 刘旭 赵佳钧 王迪

·论著·

胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞疫苗诱导特异性抗肿瘤的免疫反应

陈江 郭晓钟 李宏宇 邵晓东 刘旭 赵佳钧 王迪

目的研究人胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞(DC)诱导的特异性抗肿瘤免疫反应，为DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据。方法从外周血中分离单核细胞(PBMC)并培养成DC，从细胞形态和表面标志进行鉴定。通过RT-PCR扩增胰腺癌MiaPaCa-2细胞的MUC1 mRNA后用电穿孔法将其转染DC。采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测培养不同时间点DC的MUC1的表达。用四甲基偶氮唑蓝法检测DC存活率。采用51Cr标准细胞毒实验观察转染MUC1 mRNA的DC诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应；应用ELASA法检测CTL的IFN-γ释放量。结果培养获得的细胞呈现典型的DC形态特征和表面标志(CD40+、HLA-DR+、CD83+、CD86+)。MUC1 mRNA转染 DC 48 h后，细胞MUC1 mRNA表达水平最高，为38.43(36.89～48.06)，蛋白表达亦最强。转染后DC的存活率稳定在80%左右。转染MUC1 mRNA的 DC可有效诱导HLA-A2+/MUC+特异性CTL免疫反应；胰腺癌Capan-2细胞与转染MUC1的DC刺激MUC1特异性CTL的24 h IFN-γ释放量分别为(28.44±4.96)和(16.31±2.54)U/ml，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论人胰腺癌MUC1 mRNA体外转染DC后可诱导CTL产生特异性抗肿瘤免疫反应。

树突细胞； RNA，信使； 转染； 胰腺肿瘤； T淋巴细胞，细胞毒性

树突细胞(dendritic cells, DCs)肿瘤疫苗作为一种主动免疫的抗肿瘤方法，其临床应用已引起了学界的高度重视[1]。MUC1是一种高糖基化蛋白，具有高度的抗原性，并能够被细胞毒T细胞(CTL)所识别，因此被认为是肿瘤生物治疗的理想的靶点[2]。超过90%的胰腺癌存在MUC1的高表达，故本研究将人胰腺癌MiaPaCa-2细胞MUC1 mRNA转染患者DC，观察转染后DC诱导的MUC1特异性CTL对靶细胞的杀伤作用，为临床构建胰腺癌相关抗原MUC1 DC肿瘤疫苗提供实验依据。……