李诗林，郑银英，崔百明，都业娟，乔亚红，田桂英，向本春

（石河子大学农业生物技术重点实验室／石河子大学生命科学学院，石河子832003）

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV）最早在1959年由英国学者Luckwill和Campbell报道，命名为大果海棠线斑病毒（Line pattern virus）。我国在1989和1993年由刘福昌等［1］首次报道了苹果和梨树的ACLSV等。苹果褪绿叶斑病毒分布较广，能侵染多种果树，包括苹果、梨、桃、李、樱桃和杏，同时与其他病毒常常引起混合感染，造成树势衰退，果品产量和质量均受严重影响［2－6］。目前，最有效的脱毒方法是采用热处理和茎尖培养结合处理［7］，但在田间很难避免病毒的再度感染。近年来，利用RNA沉默实现植物抗病引起了植物病毒学研究的高度关注，并取得了进展［8－10］，如朱俊华等获得了马铃薯Y病毒坏死株系免疫抗病转基因植株［10］。同时RNA沉默技术与其他的基因工程方法相比具有很大优势，如对核苷酸序列特异性、高效性、沉默信号的可遗传性和持久性。

为此，本研究主要采用将ACLSV目标基因的正向和反向重复序列分别插入到内含子两侧，构建RNAi干扰载体，通过农杆菌介导的方法转入西方烟中，通过对转基因烟草的抗病性检测试验来评价各RNAi载体的干扰效果，旨在为研究该病毒的主要基因的功能，了解其关键致病因子，提供材料和理论依据，同时也为通过基因工程手段培育和大量繁殖具有高抗或免疫作用的无病毒栽培苗木奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

2010年3－4月，自库尔勒市、新疆兵团农二师28团和29团和沙依东园艺场采集库尔勒香梨枝条。……