秦荣，张伟，刘炜炜，张建云，黄家风

（石河子大学绿洲农作物病害防控重点实验室，石河子832003）

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）是一种寄主范围非常广范的植物病毒，能够侵染85科365属1000多种单子叶植物和双子叶植物，并且常与其它病毒以复合侵染的方式危害不同的作物。CMV与番茄花叶病毒（Tomato mosaic virus，ToMV）复合侵染是造成新疆加工番茄坏死条斑病的重要因素［1－2］，严重影响其品质和产量。利用基因工程原理将病毒本身的一些基因转化至植物基因组中获得抗性植株是当前病毒病防治的主要途径。

转录后基因沉默是植物在进化过程中形成的针对外源核酸分子入侵（如病毒侵入、转基因和转座子）的自我防卫机制，在dsRNA的诱导作用下，能够高效、特异地降解与dsRNA同源的mRNA分子。如果将植物病毒的cDNA片段构建成能编码dsRNA或自我互补的发夹型RNA（hpRNA）结构，将其导入植物就能诱导植物发生高效的基因沉默，降解与双链同源的病毒RNA分子，便可获得抗病的转基因植物［3－4］。利用该方法，Wang等［5］将大麦黄矮病毒（BYDV）的多聚蛋白基因构建成反向重复序列转入大麦，Hu等［6］将CMV的CP基因、晏立英等［7］将花生条纹病毒（PStV）的CP基因分别构建成反向重复序列转入烟草，分别获得高效的抗病毒转基因植株。由于田间病毒往往以复合侵染的方式危害，因此构建针对2个或多个病毒的沉默表达载体已成为利用该原理进行转基因的迫切需要。

本研究以严重危害新疆加工番茄的2种病毒CMV与ToMV为目标，通过重组PCR技术将ToMV部分移动蛋白基因（△MP）和CMV的部分复制相关蛋白基因（Rep）进行融合，并将其以反向重复的方式插入到内含子两侧，构建到植物表达载体上，为进一步转化植物和利用RNA沉默原理进行植物广谱抗病研究奠定基础。……