马学琴，康小兰，王 飞，付雪艳，何志梅

（宁夏医科大学 药学院，宁夏 银川 750004）

铁棒锤是毛茛科乌头属植物铁棒锤Aconitum szechenyianumGay.和伏毛铁棒锤Aconitum Flavum Hand.Mazz.的干燥块根[1]。2010年版中国药典未收载品种，为陕、甘、宁等省应用较广的一种民间草药[2]。其味苦辛，性热，有大毒，具“活血祛瘀，祛风湿，止痛”等作用[3]。目前，课题组对其所含的总生物碱以及乌头碱的含量已有研究[4－5]。本研究继续从综合评价伏毛铁棒锤质量的角度出发，建立其HPLC指纹图谱，为伏毛铁棒锤药材的鉴定提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日立LC-2000高效液相色谱仪；岛津UV-2550紫外分光光度计；奥豪斯AP210型分析天平。

1.2 药品与试剂

乌头碱对照品（批号110720-200409）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国TEDIA）；娃哈哈纯净水；其它试剂均为分析纯。铁棒锤为自采，来源：固原六盘山（样品编号S1－S3）、月亮山（样品编号S4－S5）、种植园（样品编号S6－S8）、黑城乡（样品编号S9－S10）；经宁夏医科大学药学院生药学教研室鉴定为毛茛科乌头属植物伏毛铁棒锤AconitumFlavum Hand.Mazz.的干燥块根。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：美国 Thermo ODS-2HYPERSIL（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：A-甲醇－乙腈（3∶2），B-醋酸－醋酸钠（pH＝4.5）缓冲液梯度洗脱：0～10min 1%～5%A，10～30min 5%～15%A，30～40min 15%～25%A，40～50min 25%～80%A，50～60min 80%～100%A，60～70min 100%A；检测波长：240～280nm，流速0.8mL／min，柱温：30℃。

2.2 对照品溶液制备

精密称量乌头碱对照品5.6mg，置5mL容量瓶中，色谱甲醇溶解，定容，得乌头碱对照品贮备液。

2.3 供试品溶液制备

取伏毛铁棒锤药材，粉碎，过80目筛，60℃干燥至恒重。精密称取适量（相当生药1g），置200mL具塞三角锥形瓶中，加入氯仿－甲醇－水（6∶4∶1）20mL，超声提取40min，冷却，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL得供试品溶液，临用前0.45μm微孔滤膜过滤。

2.4 伏毛铁棒锤药材指纹图谱方法学考察

（1）精密度试验：按“2.3”项下方法制备供试品溶液，取同一供试液，连续进样6次，按“2.1”色谱条件测定，选择25个共有峰进行比较。……