祝儒刚，宋立峰

(1.辽宁大学轻型产业学院，辽宁省食品生物加工工程技术研究中心，沈阳市食品生物加工与质量控制技术重点实验室，辽宁 沈阳 110036；2.辽宁经济职业技术学院，辽宁 沈阳 110122)

肉及肉制品中沙门氏菌活细胞的PCR检测研究

祝儒刚1，宋立峰2

(1.辽宁大学轻型产业学院，辽宁省食品生物加工工程技术研究中心，沈阳市食品生物加工与质量控制技术重点实验室，辽宁 沈阳 110036；2.辽宁经济职业技术学院，辽宁 沈阳 110122)

将荧光染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide，PMA)与普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)结合，通过对PMA的曝光时间、浓度进行优化，确定PMA-PCR区别死活细胞的最佳条件，并制作活细胞定量标准曲线，建立肉及肉制品中沙门氏菌活细胞的PMA-PCR检测方法。结果表明：使插入死细胞DNA中的PMA活化并且光解溶液中游离PMA的最佳曝光时间为15min；不抑制沙门氏菌活细胞DNA扩增的最大PMA质量浓度为10μg/mL；完全抑制热致死细胞DNA扩增的最小PMA质量浓度为4μg/mL。经PMA处理，含有不同比例的沙门氏菌热致死细胞和活细胞的混合液中活的沙门氏菌能够通过PCR被选择性的检测，最小检测限为20CFU/PCR。而且，经研究发现在20～2×105CFU/PCR范围内，电泳条带相对荧光强度与活细胞数的对数具有线性关系。采集30份肉及肉制品样品，利用PMA-PCR方法检测出两份生肉样品中存在沙门氏菌，经过6h的富集培养后的活菌浓度分别为2.5×103CFU/mL和3.4×103CFU/mL。

肉及肉制品；沙门氏菌；活细胞；PMA-PCR

沙门氏菌(Salmonella)是肠杆菌科的一类革兰氏阴性肠道杆菌，是细菌性食物中毒中发病率最高的一种。有资料……