苏 妮 孙振师 张化恒 （山东省莱西市畜牧兽医局 266600）

奶牛早期妊娠诊断是提高奶牛繁殖率和产奶量的重要措施，具有很高的经济价值。最早应用的早孕诊断方法是直肠检查法，但此法确诊时间晚，劳动强度大，诊断准确率受技术水平和操作状态的影响大，且诊断过程易对胚胎造成危害。所以自70年代开始，国内外进行了大量的实验室早孕诊断方法的研究，如放射免疫法、酶联免疫吸附法、免疫乳胶凝集抑制试验等，但这些诊断早孕的方法目前仍处于进一步研究阶段。为了探讨适合广大基层单位奶牛早孕诊断的方法，笔者对184头配种后21～26d的奶牛分别用RIA.、ELISA、LAIT法进行了早孕诊断的对比试验研究。

1 材料与方法

1.1 试验动物及采样

1.1.1 试验动物 选择发情配种后21～26d的黑白花奶牛184头。

1.1.2 奶样采集 取每头奶牛上午挤的混合奶为奶样，其中一部分脱脂后作RIA法测定。

1.1.3 脱激素乳的制备 取20ml乳样加2.0g活性炭，磁力搅拌器搅拌30min，置冰箱内过夜，2000r/min离心1h，取上清液同法每离心1次收集上清液即为去激素率98%的脱激素乳，用于ELISA法测定。

1.1.4 尿样采集 取非晨时自然排出的尿液，用作LAIT的测定尿样。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 RIA法的试剂与仪器 抗血清是以孕酮-11a-半琥珀酸盐-RSA所免疫的家兔制备的，孕酮放射免疫药盒由中国科学院动物研究所提供。

1.2.2 ELISA法试剂与仪器 抗血清同RIA法制备，辣根过氧化物酶（HRP.R2≈3.0），牛血清白蛋白，氯甲酸异丁酯，3，3′5，5′-四甲基苯胺（TMB），CP等。40孔ELISA微量测定板，S-ELISA-833型酶标测定仪。酶结合物按Dawsow（1978）和Munro（1984）的混合酸酐法合成的孕酮-辣根过氧化物酶（P-11-HRP）。……