上海医药工业研究院（200040）史卓维

上海市食品药品检验所(201203）史芳亮 陈钢Δ

糜蛋白酶（Chymotrypsin），又称胰凝乳蛋白酶，系从牛或猪胰腺中提取的一种蛋白水解酶，具有肽链内切酶的作用，临床上主要用于眼科手术，也可用于创口或局部炎症，以减少局部分泌和水肿[1]。注射用糜蛋白酶为无菌冻干粉末，辅料为20%甘露醇和右旋糖酐20，现行质量标准为2010版中国药典。

比活是单位蛋白质重量下的酶活力，它是在理化方法无法控制酶的纯度或有关物质时可采用的最有效的控制酶纯度的方法之一。由于注射用糜蛋白酶现行质量标准中仅有效价测定，而没有比活或者纯度检查项，因此无法对企业低效价原料多投料的情况进行监控，从而可能对患者的用药安全性造成潜在危害。目前，国内外文献尚未有注射用糜蛋白酶比活测定与纯度测定方法的报道。本文旨在分别建立一种适用于注射用糜蛋白酶比活测定的方法以及RP-HPLC纯度测定方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），LC-20A型高效液相色谱仪（日本岛津公司），Spectra max 340pc酶标仪（美国分子仪器公司），Foss Kjeltec 2400自动凯氏定氮仪（瑞典FOSS公司），UV-2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司），瑞士Mettler Toledo AB204-S电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司），Grace 214TP C4色谱柱（250mm×4.6mm，5μm，美国格雷斯公司）。

附表1 凯氏定氮法加样回收率测定结果

附表4 注射用糜蛋白酶RP-HPLC纯度测定结果

考马斯亮蓝试剂盒（货号23200，美国Thermo公司），BCA试剂盒（货号QPBCA，美国Sigma公司），牛血清白蛋白标准品（BSA，批号14619-200919，中国药品生物制品检定所），USP糜蛋白酶标准品（货号1134007，美国药典会），硫酸铜、酒石酸钠、氢氧化钠、碳酸钠、硫酸铵均为分析纯，乙腈、三氟乙酸为色谱纯，水为去离子水。……