何灏彦

（湖南化工职业技术学院化工系，湖南 株洲412004）

壳聚糖是甲壳素脱乙酰基后的产物，是一种天然的阳离子型直链氨基生物多糖。壳聚糖具有生物相容性，无毒，无过敏反应，但通常分子量很大、只能溶于某些酸性溶液中，使得它的应用受到很大的限制，甚至其某些特殊功能只有在降解成壳寡糖后才能表现出来。壳聚糖的降解方法主要包括化学法、物理法、酶解法[1］，其中，酶解法具有能耗低、原料价廉、环境污染小、反应条件温和、易控制、设备简单、产品生物活性高等优点，具有广阔的应用前景[2］。

壳聚糖酶是一种对线性壳聚糖具有分解作用的专一性酶，可以选择性地、特异性地切断壳聚糖的β－1，4－糖苷键，得到特定分子量范围的壳寡糖[3］。作者在此以壳聚糖为诱导物，诱导卷枝毛霉产生壳聚糖酶，并对产酶条件进行了优化。

1 实验

1.1 试剂

pH 值为7.2的 Tris－HCl缓冲溶液：50.0mL 0.1mol·L－1Tris＋44.7mL 0.1mol·L－1HCl。

DNS（3，5－二硝基水杨酸）试剂：3，5－二硝基水杨酸1%、苯酚0.2%、亚硫酸钠0.05%、氢氧化钠1%、酒石酸钾钠20%，贮存于棕色瓶中，一周后稳定。

1.2 培养基

PDA斜面培养基：称取马铃薯200g，去皮，切块，煮沸0.5h后用纱布过滤，加20g葡萄糖、20g琼脂，溶化后补水至1000mL，121℃灭菌20min。

葡萄糖－硫酸铵培养基：葡萄糖2%，KH2PO40.1%，（NH4）2SO40.5%，不同质量（0.0g，0.2g，0.4g，0.6g，0.8g，1.0g）的脱乙酰度为99%的壳聚糖，自来水1000mL。分装后，121℃灭菌20min。

1.3 卷枝毛霉的培养及壳聚糖酶的分离纯化

在含一定浓度壳聚糖的葡萄糖－硫酸铵液体培养基中，将卷枝毛霉于一定温度、一定pH值、一定转速下摇床培养一定时间；将10L培养基通过砂芯漏斗过滤，得到菌丝体；将其置于研钵中，用玻璃粉研磨1h，然后用pH 值为7.2的20mmol·L－1Tris－HCl缓冲溶液稀释；……