夭建华，管 莹，高 茜，米其利，朱洲海，李雪梅，缪明明

（云南烟草科学研究院，云南 昆明650106）

体外细胞毒性试验作为一类重要的体外试验，在新药研发、化学物质毒性评价方面发挥着重要的作用[1～5］。中性红比色法和噻唑蓝（MTT）比色法具有简便、快捷、灵敏等特点，是目前应用较多的毒理学检测细胞毒性的方法。作为评价方法，其结果的可重复性十分重要。

中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary，CHO）细胞被广泛应用于细胞毒理学试验。但CHO细胞连续传代至一定代次后，在检测参比标准样品的细胞毒性时，结果有显著差异。为了寻找生物学状态稳定的连续传代代次，作者在此比较了连续传代培养的CHO细胞的形态学特征，并研究了CHO细胞连续传代培养对细胞毒性试验结果的影响，拟为提高中性红比色法和MTT比色法进行细胞毒性评价的稳定性提供参考。

1 实验

1.1 试剂与仪器

DMEM／F12（Solarbo 公 司），胎 牛 血 清 （美 国Klark），PBS，胰酶，中性红（Sigma公司），二甲基亚砜（DMSO）。

二氧化碳培养箱（Forma公司），96孔及24孔细胞培养板（Corning公司），酶标仪（Bio－Rad公司），半自动转盘式吸烟机（Borgwaldt RM20／CS）。

1.2 卷烟烟气样品的制备[6］

利用半自动转盘式吸烟机抽吸40支标准测试用卷烟3R4F，用直径92mm的剑桥滤片捕集燃吸后产生的烟气总粒相物（TPM），称重；将剑桥滤片放入三角瓶中，加入适量DMSO，置于超声仪上超声20min；用无菌滤纸过滤，收集TPM提取液，调整TPM在DMSO中的终浓度为10mg·mL－1；将样品分装后储存于－80℃，待用。

1.3 方法

1.3.1 细胞的传代培养

将CHO细胞复苏后制成单细胞悬液，调整细胞密度，接种到细胞培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养，记为第1代细胞。……