乳糖诱导鸡β-防御素3在大肠杆菌中的融合表达
2012-10-10贺元欣王会岩吉林医药学院检验学院吉林吉林132013
莫 索,贺元欣,刘 欢,王 彦,魏 刚,张 琦,王会岩 (吉林医药学院检验学院,吉林 吉林 132013)
细菌对传统抗生素的耐药性是当今全球性难题,因此,发展新的动物抗感染战略势在必行。防御素(defensin)作为一种新型的生物活性肽,具有独特的抗菌机理,不受传统抗生素耐药菌株影响,它可以替代抗生素而发挥更广谱的抗菌作用,同时它也可以作为免疫调节剂来调节机体免疫系统,在感染中发挥重要作用[1]。据报道,鸡体内的基因共编码了13种鸡β-防御素(chicken defensinβ,Gal),这些鸡防御素基因被命名为Gallinacin 1-13[2]。由于机体自身合成法操作复杂,不易提取分离纯化,而且获得量少,因此现在多采用基因工程合成法,此法易于大规模生产防御素,并且基因克隆与表达为其大规模生产提供了手段[3]。
虽然非代谢性乳糖类似物IPTG(isopropyl-β-D-thiogalactoside)是一种广泛使用的高效乳糖操纵子的诱导剂,它通过调节Lac启动子,使目的基因片段得以转录获得所需目的蛋白[4]。目前IPTG通常用于外源蛋白的发酵生产中,但价格昂贵且对人体存在潜在的毒性,世界上一些国家已明文规定在生产人用重组蛋白的生产工艺中不能使用IPTG进行诱导[5],因此寻求IPTG的替代物已成为国内外规模化生产基因工程重组药物的迫切需求。乳糖是乳糖操纵子的天然诱导物,与IPTG不同的是它必须借助乳糖通透酶作用进入细胞,并经β-半乳糖苷酶作用转化为异乳糖后方能起诱导作用[6-7]。同时乳糖本身作为一种碳源,不断被细菌代谢利用。因此乳糖作为诱导剂的诱导过程,其诱导剂浓度始终处于动态变化过程中,诱导过程更加复杂,需对其诱导条件进行更细致的研究和优化[8-10]。……
