刘雪茹，谭晓秋，杨 艳，曾晓荣，唐显玲△

（泸州医学院附属医院：1.麻醉科；2.医学电生理省部共建教育部重点实验室，四川泸州 646000）

大电 导钙激活钾通道 （large conductance Ca2＋－activated K＋channels，BKCa）在血管平滑肌等多种组织中表达，并且在许多病理和生理过程中起重要作用，是一些内源性和外源性血管活性物质发挥作用的重要靶点［1］。BKCa在血管平滑肌细胞上分布极为丰富，携带约70%～80%的外向电流，BKCa的激活引起膜的超极化，从而调节细胞的兴奋性［2］。近年来，细胞内局部自发性的Ca2＋释放事件日益引起了人们的关注。平滑肌细胞内肌质网（sarcoplasmic reticulum，SR）上钠诺定钙释放通道的协调开放产生的钙火花引起细胞内局部、瞬时的Ca2＋浓度升高激活邻近细胞膜上的BKCa，使其开放概率显著增加，产生自发瞬时外向电流（spontaneous transient outward currents，STOCs）［3］。STOCs可进一步引起细胞膜超极化，抑制经L型钙通道的Ca2＋内流，促使平滑肌舒张。本研究通过应用两性霉素B穿孔的全细胞膜片钳技术，在前期工作基础上，研究急性酶分离的小鼠脑动脉平滑肌细胞STOCs的基本特性，并利用单通道膜片钳技术进行通道动力学调控研究。

1 材料与方法

1.1 材料 正常小鼠10只，体质量18～22g，雌雄不拘，由泸州医学院动物房提供。F型胶原酶、Ⅱ型胶原酶、二硫苏糖醇（DTT）、二巯基赤藓醇（DTE）、木瓜蛋白酶、清蛋白、两性霉素B、IbTX均购自Sigma公司，其余试剂为国产分析纯。采用微管电极拉制仪（PC－10，Narishige，Japan）进行玻璃微管电极的拉制，电极在充灌电极液后尖端阻抗为2～4MΩ，电流信号经膜片钳放大器（Axopatch 200B）放大，2kHz低通滤波，经12位A／D－D／A转换器（Digidata1322A）转换后在专用软件系统pClamp（Version 9.0，Axon Instruments，USA）控制下记录并储存于计算机硬盘内，采样频率为10kHz，适当补偿串阻后的入口阻抗小于或等于10MΩ。……