戴 银，赵瑞宏，胡晓苗，张丹俊

（安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，安徽合肥230031）

黄病毒属是一群具有包膜的单股正链RNA病毒，是黄病毒科中最大的家族，包括日本脑炎病毒、登革病毒、黄热病毒和丙型肝炎病毒等多种病毒。该病毒大多数可通过吸血的节肢动物，如蚊、蜱等媒介传播［1－2］。2010年以来，我国江苏、山东和浙江等地均报道暴发了一种引起鸭产蛋大幅下降的疾病，给蛋鸭养殖业造成了很大的经济损失［3－4］。部分研究证实，该病主要由造成鸭出血性卵巢炎的黄病毒引起，由于鸭感染该病毒可导致卵巢发育不良，卵泡变性、变形，卵泡膜充血等症状，进而造成产蛋量下降［5］。与此同时，安徽省部分鸭群也发现了类似病症，为调查发病的原因，我们获取了病料，通过分离鉴定，证实为鸭黄病毒感染所致［6］。我们进一步克隆鸭黄病毒安徽分离株NS5基因部分序列，研究其遗传进化特征，为鸭黄病毒病的防控提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

试验蛋鸭来自安徽省望江养鸭场，具有产蛋期产蛋量突然下降的症状。鸭胚购自肥西县鸭场。Trizol Reagent购自Invitrogen公司；cDNA第一链合成试剂盒、Taq酶、d NTP等试剂，购自宝生物工程（大连）有限公司。通过GenBank数据库获得9条黄病毒科黄病毒属毒株NS5基因的相应序列作为分析样本。

1.2 方法

1.2.1 引物设计 经Oligo6.0软件分析，参照Gen－Bank数据库中登录的黄病毒基因序列（登录号：JQ595407），以及已发表的文献［7］，设计一对扩增引物：P1：5′－CTA （T／C）CA （T／C）GGAAG （T／C）TACGAAGT －3′；P2：5′－CTTTTCTCGCTT （T／C）CCCATCAT －3′。

P1、P2预期扩增片段大小为469 bp，扩增的目的片段命名为DFV－NS5－1。引物由宝生物工程（大连）有限公司合成。……