喻礼怀 郝志敏 付 聪 王梦芝 王洪荣

（扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009）

近年来，关于硫胺素在反刍动物方面的研究已有相关的报道。本实验室的前期研究表明，奶牛在常规日粮(精粗比为3∶7)条件下饲喂可以不添加硫胺素。而在高精料日粮下反刍动物日粮中有必要添加硫胺素。因此有必要通过试验来确定硫胺素的适宜添加量。

1 材料与方法

1.1 试验材料

盐酸硫胺素：纯度≥99%（Solarbio）。

1.2 试验动物及底物组成

从扬州大学试验牧场选取体重接近、身体健康及安装永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛4头。试验底物及硫胺素添加量见表1，人工唾液盐的配制见表2。

表1 底物组成与硫胺素的添加量

1.3 试验设计及饲养管理

试验采用单因子试验设计，5个硫胺素水平，分别是0、60、120、180和240 mg/kg。对照组不添加盐酸硫胺素，试验组分别添加不同剂量的盐酸硫胺素（纯度≥99%，硫胺素的有效含量分别为0、53.5、107.0、160.5、214.0 mg/kg），每组3个重复。

表2 人工唾液盐缓冲液组成含量（g/l）

采集瘤胃液用于体外培养，培养底物是半纯合日粮，其精粗比设计为6∶4。培养时间72 h。分别在0、1、3、6、10、24、48、72 h采集培养液。试验期间每日7:00和19:00两次等量饲喂，自由饮水，用于采集瘤胃内容物样品。

人工唾液盐缓冲液在使用前1 d配制（见表2）并通入CO2待用。

1.4 体外培养步骤

早晨饲喂前采集奶牛瘤胃液，装在自制真空负压装置。每头瘘管牛采集100 ml瘤胃液，过滤后装入保温瓶。往保温瓶通入CO2，并置于恒温水浴中保温。

培养试验前3 h配制人工唾液盐，即配即用。每个重复（培养瓶）添加1.2 g配制好的底物，并按上述试验设计添加硫胺素；……