苏金仁，陈 瑾，黄秀深，张丰华，刘童婷，陈 佳

（1.成都中医药大学，四川成都610075； 2.四川好医生攀西药业有限责任公司,四川成都615000）

美洲大蠊（peripLaneta americana）俗称蟑螂、偷油郎等，是蜚蠊的三大优势种之一，隶属节肢动物门（phyLum arthropoda）昆虫纲（insecta）有翅亚纲（pterygota）蜚蠊目（blattaria）。全世界发现并记载的蟑螂种类约3 000余种，广泛分布于热带、亚热带地区，在我国南方也有广泛分布，蜚蠊作为药用最早记载见于《神农本草经》，被列入中品，“味咸、寒，生川泽，治血瘀 坚、寒热，破积聚，咽喉痹，内寒无子”。《本草纲目》中记载，捕捉后用沸水烫死，晒干或烘干，以干燥或新鲜全体入药，有活血化瘀、解毒消疳、利水消肿等功效［1］。民间有用蟑螂治疗肝炎、肝硬化、肝癌者［2］。目前对于美洲大蠊醇提物抗肿瘤的报道甚多，但从全虫角度的研究甚少，本研究正是从全虫角度来观察其对肝癌的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 实验材料

美洲大蠊精粉（未脱脂型、脱脂型），由绵阳好医生中药饮片有限公司提供，批号：101201；环磷酰胺（CTX），通化茂祥制药有限公司，批准文号：国药准字H22022234；氟尿嘧啶注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批准文号：H12020959；昆明种雌性清洁级小鼠，体重18 g～22 g，由成都达硕生物科技有限公司提供，SCXK（川）2008-24，质量检测单位：四川省实验动物检测中心；小鼠H22细胞株，由南京凯基生物科技发展有限公司提供，目录号KG080。昆明种清洁级雌性小鼠550只，体重18 g～22 g。

1.2 实验方法

1.2.1 H22细胞悬液的制备 将腹腔接种H22腹水细胞7 d的瘤源鼠脱颈处死，固定于超净工作台的蜡板上，腹部消毒处理后，剪开腹部皮肤，用巴氏吸管吸取乳白色腹水于烧杯中（烧杯置于冰袋上），按1∶3添加生理盐水，吹打均匀；在小鼠体内传2代，调细胞数浓度为5.0×106个/mL，肿瘤细胞活力在95%以上。

1.2.2 动物分组 按体重将小鼠随机分为空白组、模型组、5-FU组、CTX组、治疗组（美洲大蠊未脱脂粉及脱脂粉各设大、中、小剂量组），每组10只，实体瘤和腹水瘤实验均重复3批。

1.2.3 动物模型制作 将浓度为5.0×106个/mL的H22细胞悬液接种到健康小鼠右腋皮下，0.2 mL/只，建立实体瘤模型；于小鼠腹腔内接种H22细胞悬液，0.2 mL/只，建立腹水瘤模型。

1.2.4 给药、取材 5-FU组、CTX组隔日腹腔分别注射CTX、5-FU，0.2 mL/只，共5次；治疗组按大、中、小剂量分别予以相应药物灌胃，0.4 mL/只，连续10 d。空白组及模型组予以生理盐水灌胃，0.4 mL/只，连续10 d。在最后一次给药结束24 h后，分别称取小鼠体重，眼眶取血后处死，剥取肿瘤并称重，计算抑瘤率。对于腹水瘤模型实验，在给药10 d后，以20 d为限，记录各组小鼠死亡情况，统计并计算对小鼠生命时间延长率。

2 结果

2.1 美洲大蠊对小鼠肝癌H22（实体型）生长的抑制作用

结果见表1。表1选用方差分析进行统计学分析，与对照组两两比较时，方差齐性选用LSD法，方差不齐时选用Tamhane法。末次体重指含瘤体重。实验结果表明，与模型组比较，美洲大蠊精粉脱脂及未脱脂型中、小剂量组、CTX组、5-FU组小鼠瘤重降低，差异有统计学意义（P<0.01）。第二、三批与第一批结果显示趋势一致。

2.2 美洲大蠊对H22（腹水型）小鼠生存时间的影响

结果见表2。表2选用非参数法KruskaL-WaLLis H法进行显著性检验，两两比较时，进行Nemenyi秩和检验。实验结果表明，与模型组比较，美洲大蠊精粉脱脂型中剂量组、5-FU组小鼠生存天数延长，差异有统计学意义（P＜0.05，P<0.01）。与第二、三批实验结果显示趋势一致。

表1 美洲大蠊对小鼠肝癌H22（实体型）生长的抑制作用（第一批）（±s）

表1 美洲大蠊对小鼠肝癌H22（实体型）生长的抑制作用（第一批）（±s）

注：与模型组比较，1）P<0.0 1

抑瘤率（%）-52.48 5-FU组 25 口服给药×5 10 20.28±1.54 24.76±1.28 60.11美洲大蠊（小）1 125 腹腔给药×10 10 21.95±2.35 22.73±1.17 41.03美洲大蠊（中）2 250 腹腔给药×10 10 20.37±1.16 23.39±0.71 37.71美洲大蠊（大）4 500 腹腔给药×10 10 21.81±2.08 21.23±1.16 1.35脱脂大蠊（小）1 125 腹腔给药×10 10 20.84±1.54 22.14±1.22 15.85脱脂大蠊（中）2 250 腹腔给药×10 10 21.80±1.57 23.80±0.87 28.93脱脂大蠊（大）4 500 腹腔给药×10 10 21.58±0.97 24.25±0.76 4.37 10 10 10 10 10 10 10 0.55±0.121）0.82±0.131）0.87±0.211）1.37±0.19 1.17±0.151）0.99±0.111）1.33±0.18 0.00 0.00 0.00 0.81 0.01 0.00 0.42

表2 美洲大蠊对H22（腹水型）小鼠生存时间的影响（第一批）（±s）

表2 美洲大蠊对H22（腹水型）小鼠生存时间的影响（第一批）（±s）

注：与模型组比较，1）P<0.0 5，2）P<0.0 1

生存天数（d）P值 ILS（%）始 末模型组 — 腹腔给药×10 10 0 21.61±1.77 17.10±3.00 - -CTX组 20 口服给药×5 10 0 22.28±1.02 20.90±4.23 0.08 22.22 5-FU组 25 口服给药×5 10 0 22.85±1.67 23.10±5.002）0.01 35.09美洲大蠊（大）4 500 腹腔给药×10 10 0 21.88±1.04 14.80±4.24 0.72 -13.45美洲大蠊（中）2 250 腹腔给药×10 10 0 22.62±1.26 19.50±4.43 0.39 14.04美洲大蠊（小）1 125 腹腔给药×10 10 0 22.87±1.27 20.40±1.71 0.10 19.30脱脂大蠊（大）4 500 腹腔给药×10 10 0 22.20±1.78 19.50±2.37 0.35 14.04脱脂大蠊（中）2 250 腹腔给药×10 10 0 22.69±1.42 21.71±1.981）0.02 26.98脱脂大蠊（小）1 125 腹腔给药×10 10 0 23.03±1.56 17.11±2.03 1.00 0.06组别 剂量（mg/kg）给药途径×次数n 初始体重（g）

2.3 美洲大蠊对H22（实体型）小鼠血常规的影响

结果见表3。表3选用方差分析进行显著性检验，与对照组两两比较时，方差齐性选用LSD法，方差不齐时选用Tamhane法。结果表明，与空白组比较，各组小鼠单核细胞和红细胞水平均呈下降趋势，淋巴细胞除美洲大蠊精粉末脱脂型大剂量组外均呈下降趋势，而白细胞水平除5-FU组外均呈上升趋势，差异有统计学意义（P＜0.05，P<0.01，P<0.001）。

3讨 论

原发性肝癌（primary Liver cancer，PLC，简称肝癌）是原发于肝细胞或胆管细胞的癌症，是临床上最常见的恶性肿瘤之一。大量的临床实践证明肝癌是中医药治疗最常见到效果的肿瘤之一［3］，因此，不断加强对中医药治疗肝癌的探索倍显重要。蜚蠊作为一个庞大的昆虫家族在地球上已经存在了3.2亿年，与恐龙属同一时代出现的生物，它是世界上生命力最强、最古老、至今繁衍最成功的昆虫类群之一［4］。美洲大蠊为其属中入药最广泛的一种，近年来对其研究日益深入，并且开发出一系列疗效确切的新药，如“康复新滴剂”、“金克胶囊”、“肝龙胶囊”、“消 益肝片”等。美洲大蠊虫粉有助于提高肉鸡体内抗氧化酶的活性，清除自由基，增强抗氧化能力。机体抗氧化作用增强，可减少自由基和脂质过氧化产物对机体细胞膜完整性的破坏，从而增强机体免疫力和抗病力［5］。美洲大蠊提取物（APA）具有较好的抑制细胞外基质的合成以及促进其降解的作用［6］。张成桂等［7］对采取新工艺提取的美洲大蠊抗癌活性成分做了体外抗氧化实验，研究显示，该混合物主要由一系列小分子多肽组成，占抗癌活性成分的62.7%，总成分清除DPPH·自由基、·OH自由基和总还原能力均表现出量效依赖关系。本实验研究结果显示，美洲大蠊对肝癌治疗作用确切，未脱脂型美洲大蠊的抑瘤效果随剂量倍增而递减，脱脂型美洲大蠊抑瘤效果以中剂量为佳，且能延长荷瘤小鼠的生存时间。白细胞升高对组织损伤是全身的炎症反应过程［8］，血常规检测显示美洲大蠊小剂量、脱脂型中剂量能在一定程度上控制肿瘤局部炎症的扩散。美洲大蠊对淋巴细胞、红细胞、单核细胞亦有影响，所蕴含的意义尚待进一步研究。

表3 美洲大蠊对H22（实体型）小鼠血常规的影响（±s）

表3 美洲大蠊对H22（实体型）小鼠血常规的影响（±s）

注：与空白组比较，1）P<0.05，2）P＜0.001；与模型组比较，3）P<0.05，4）P<0.01，5）P＜0.001

组别 样本量（n） 白细胞（109/L） 淋巴细胞（109/L）单核细胞（109/L）红细胞（1012/L）空白组 10 2.60±0.14 2.24±0.08 0.87±0.01 2.8±0.08肿瘤对照组 10 4.38±0.452）2.25±0.122）0.50±0.142）2.41±0.192）CTX 组 10 3.18±0.405）1.63±0.192）5）0.61±0.102）2.30±0.082）3）5-FU 组 10 1.49±0.102）5）0.82±0.062）5）0.32±0.022）2.53±0.072）3）美洲大蠊（小）10 3.23±0.152）5）1.62±0.192）5）0.61±0.132）2.15±0.072）5）美洲大蠊（中）10 3.51±0.182）3）1.96±0.062）4）0.58±0.022）2.24±0.092）4）美洲大蠊（大）10 4.10±0.072）2.39±0.11 0.48±0.122）2.21±0.062）5）脱脂大蠊（小）10 3.80±0.292）1.81±0.261）3）0.54±0.872）2.28±0.092）3）脱脂大蠊（中）10 3.10±0.291）5）1.37±0.132）5）0.48±0.082）2.17±0.172）5）脱脂大蠊（大）10 4.12±0.352）1.89±0.142）5）0.46±0.102）2.15±0.062）5）

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［3］陈小峰，华碧春.中医药治疗原发性肝癌的若干问题探讨［J］.福建中医药大学学报，2011，21（3）：50.

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