阎双缓 陈翠英 王素平 唐亚芳 宋海燕 耿建章 王晓静 高朋彬

Toll样受体（Toll-like receptors，TLRs）是连接天然免疫及获得性免疫系统的重要桥梁[1、2]，其中TLR4主要表达在巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞及内皮细胞上，它识别病原体相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）而引起机体特异性免疫反应。TLR4在乙型肝炎中的作用机制复杂，其特异的模式识别方式和相互调节的网络反应参与了慢性HBV感染的发病，同时具有抗HBV复制的作用[3、4]。但TLR4在慢性HBV感染的发生、慢性化、重型化，以及肝癌的发生中的确切作用和具体机制尚不清楚。本研究观察了乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞表面TLR4受体表达水平。

资料与方法

一、研究对象 收集2010年2月至2011年2月我院门诊及住院的慢性HBV感染者70例，其中慢性HBV携带者30例（男性19例，女性11例，平均年龄40±10岁），乙型肝炎肝硬化患者40例（男性30例，女性10例，平均年龄52±8岁，Child-Pugh A级15例，B级13例，C级12例）。符合2000年西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准[5]。另选健康对照人群30例，男性18例，女性12例，平均年龄31±11岁。排除HAV、HCV、HDV、HEV 或HIV合并感染及肝癌患者，近3个月内未用过抗病毒药物及糖皮质激素等影响免疫功能的药物。

二、外周血单个核细胞TLR4检测 使用流式细胞仪检测，取EDTA抗凝血细胞悬液100μl，分别加入APC-抗-CD14单克隆抗体 10μl和 PE-抗 -TLR4单克隆抗体10μl，室温放置30min，加入红细胞裂解液2ml，避光静置15min，离心，加1ml PBS震荡洗涤2次，设置不加抗体阴性对照。离心弃去保存液，所得细胞以PBS调整细胞数至2×109/L，将标本置于流式细胞仪上，以APC-抗-CD14阳性设门，共获取门内10000个单个核细胞。……