初发性类风湿关节炎患者外周血中Tfh细胞及其相关细胞因子的临床意义

2012-09-15程路峰丁剑冰

基础医学与临床 2012年11期

徐琦，程路峰，孟岩，付伟，杨昭，丁剑冰*，罗莉*

(新疆医科大学1.基础医学院;2.公共卫生与预防医学博士后流动站;3.第一附属医院风湿科，新疆乌鲁木齐830011)

滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells，Tfh细胞)是近年来新发现的，真正意义上辅助B细胞功能的T细胞亚群，其辅助B细胞活化、增殖、分化和分泌免疫球蛋白［1］。在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)中，B细胞分泌大量高亲和力抗体可诱发炎性反应，致关节损伤［2］。本实验拟通过对RA患者外周血Tfh细胞表型及相关细胞因子的检测，探讨其与初发性RA发病的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象及主要试剂

1.1.1 研究对象:RA组:新疆医科大学第一附属医院风湿科初次就诊患者，符合1987年美国风湿病学会(ACR)RA诊断标准。对照组:为健康志愿者。各组均签署知情同意书。

1.1.2 主要试剂:FITC标记的抗CXCR5，CD3抗体;PE标记的抗CD8、CD3抗体;PerCP标记的抗CD4抗体、PE-cy7标记的抗 ICOS抗体以及同型对照(Becton Dickinson公司)。ELISA试剂盒(R＆D公司)。

1.2 免疫荧光标记和流式细胞术检测:抗凝外周血100 μL，分别加入FITC标记的抗CXCR5，PE标记的抗CD3，PerCP标记的抗CD4，PE-cy7标记的抗 ICOS抗体各20 μL或者 FITC标记的CD3，PE标记的 CD8和PerCP标记的 CD4抗体各20 μL，按规程操作。分析Th/Tc细胞，先以CD3+细胞设门分群后，分析CD4+、CD8+细胞百分率(图1)。Tfh细胞分析，以FSC/SSC设门，得到CD3+CD4+细胞，进而分析ICOS和CXCR5的表达(图2)。

1.3 血清学指标检测:按照ELISA试剂盒操作步骤检测，酶标仪检测450 nm处的吸光度(A)值。

1.4 统计学分析:数据采用SPSS14.0统计软件处理。数据以均数±标准差(±s)表示，根据方差齐性检验结果，两组间比较采用独立样本t检验，不同指标之间进行Spearman相关分析。