登革病毒4型E蛋白的表达与多克隆抗体的制备

2012-09-15李竹石杨会强曾献武刘莉娜俞永新李玉华

基础医学与临床 2012年11期

关键词：检测

李竹石，林华，杨健，杨会强，曾献武，赵宇，刘俐，刘莉娜，康庄，俞永新，李玉华*

(1.中国生物技术集团公司成都生物制品研究所有限责任公司，四川成都610023;2.中国食品药品检定研究院，北京100050)

登革病毒(Dengue virus，DENV)属于黄病毒科黄病毒属，分为1、2、3和4这4个不同的血清型，是一类经蚊媒传播的单股正链RNA病毒。登革病毒可引起登革热(Dengue fever，DF)及更严重的登革出血热(Dengue hemorrhagic fever，DHF)与登革休克综合征(Dengue shock syndrome，DSS)，目前尚无特异性药物与疫苗问世，因此已成为全球尤其是热带与亚热带地区人群健康的主要威胁之一。根据WHO发布的信息，全球每年约有1亿登革热患者，死亡达2.5万人。近年来，登革热在我国的发病率亦呈显著上升趋势［1－3］。

登革病毒基因组编码3个结构蛋白(C、prM、E)和7 个非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5)。其中，结构蛋白E包括3个结构域:I区、II区和III区，其中III区含有IgG免疫球蛋白样折叠，并通过二硫键稳定自身结构，是登革病毒与宿主细胞结合的主要位点，也是诱导机体产生保护性中和抗体和血凝抑制抗体的主要部位［4－9］。本研究分别将去除C端跨膜区的登革病毒4型E蛋白(DENV4E，402AA)以及 E 蛋白 III区(DENV4EIII，126AA)克隆到pET-32a(+)质粒中，构建两种蛋白的表达载体，并利用 IPTG分别诱导 DENV4E与DENV4EIII蛋白在原核细胞中大量表达，以表达的蛋白免疫家兔并采集血清，分别制备出针对DENV4E与DENV4EIII蛋白的多克隆抗体，并对其进行鉴定，从而为进一步的研究提供依据。