马 兰 靳国恩 杨应忠 韵海霞 白振忠 格日力

(青海大学医学院高原医学研究中心，西宁810001)

人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen，HLA)系统是一群与人的免疫应答反应密切相关的基因簇，定位于6p21．31区，长3 600 kb，是目前所知人体内最复杂的显性多态及免疫遗传系统，成为研究人类群体遗传特征的最佳遗传标志。研究表明，HLA等位基因的分布具有显著的种族、地域特异性，并且由于HLA等位基因间存在连锁不平衡，其分布也具有明显的种族和地域差［1，2］。因此，对不同地域的聚居少数民族进行HLA等位基因频率的研究，了解其分布特征，对寻找HLA相合无关供者具有实际意义;同时也可以为人类学、免疫遗传学、法医学、疾病相关性研究等提供和积累基础资料。土族是青海省特有的民族，分布比较集中，民族间通婚现象比较少，其基因的保守性强，形成自己独特的遗传基因频率分布。我们采用聚合酶链反应-直接测序分型(Polymerase chain reaction sequencebased typing，PCR-SBT)方法对青海土族地区人群中47名健康无关个体进行HLA-A、B、DRB1基因座高分辨分型，从而了解青海土族人群中HLA等位基因分布情况及特点。

1 对象与方法

1．1对象 青海土族地区健康人47名，其中男性14名，女性33名。

1．2 主要仪器试剂 ABI29700型PCR扩增仪、蛋白酶-K、TaqDNA聚合酶(华美生物公司);BigDye®Terminator测序试剂盒、ABI-3730XL型DNA测序仪(Applied Biosystems，Foster city，CA，USA)。

1．3 基因组DNA制备 静脉采血2 ml，加EDTA(乙二胺四乙酸)抗凝后于－20℃冷冻保存;根据微量快速盐析法使用蛋白酶-K从外周血白细胞中提取基因组DNA;使用琼脂糖凝胶电泳法收集、纯化并测定DNA浓度。

1．4 PCR扩增 取10 μl PCR引物混合物(其中含有HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1的2对、1对、7对组特异性正反向引物)，加入3．0 μl上述DNA稀释液，进行PCR扩增。……