廖玉婷 叶 剑 李 青 张晓丹 齐 晖 李富荣

(暨南大学第二临床医学院(深圳市人民医院)干细胞与细胞治疗实验室，深圳518020)

胰岛移植是治愈糖尿病的潜在治疗方法之一，但目前仍然面临着供体不足和免疫排斥等难题。α1-抗胰蛋白酶(alpha 1-antitrypsin，AAT)是体内的一种重要丝氨酸蛋白酶抑制剂。最近研究发现AAT有保护胰岛细胞、抑制炎症反应、抗凋亡和诱导特异性免疫耐受的作用。NIT-1细胞系是非肥胖糖尿病(Non-obese diabetic，NOD)小鼠来源的胰岛β细胞系，能稳定分泌胰岛素，常作为细胞模型用于糖尿病的研究［1］。本研究旨在建立稳定表达人AAT基因NIT-hAAT细胞系，并观察hAAT在糖尿病细胞治疗中对β细胞的免疫保护作用。

1 材料与方法

1．1 细胞株、实验动物及主要试剂 携带人AAT基因的原核质粒pBS-RSV-hAAT由美国华盛顿大学Andre Lieber教授惠赠。真核质粒载体 pDsRed-N111和大肠杆菌DH-5α均由北京大学深圳研究生院卢智刚教授惠赠。小鼠胰岛NIT-1细胞株(20-40代)由中山大学附属第二医院内分泌科的李芳萍主任惠赠，在含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和链霉素的DMEM低糖培养基，37℃、5%CO2的饱和湿度培养箱中培养。4到5周龄雄性BALB/c小鼠由广东省医学实验动物中心提供。

PCR试剂购自Fermentas公司;转染试剂LipofectamineTM2000购自Invitrogen公司;限制性核酸内切酶BglⅡ、XhoⅠ、ApaLⅠ，连接酶及去磷酸化酶购自TaKaRa公司;质粒提取及胶回收试剂盒购自Axygen公司;DMEM培养基、胎牛血清及Western blot化学发光底物购自Thermo公司;人α1-抗胰蛋白酶抗体购自GeneTex公司;二抗山羊抗兔IgG购自SouthernBiotech公司;链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)购自ALEXIS公司;鼠胰岛素酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自Millipore公司;血糖试纸及血糖仪购自Lifescan公司。……