靳颖 杨爽风 王俊妨 刘锦 崔云涛 周鑫 赵化冰

(1.武警后勤学院附属医院检验科，2.武警后勤学院职业与环境危害生物标志物重点实验室，天津 300162)

随着广谱抗生素的广泛应用，器官移植、介入治疗等技术的开展，免疫功能低下患者日益增多，真菌感染在临床上越来越常见。其中，白念珠菌占血源性真菌感染的半数以上，非白念珠菌如热带念珠菌等的感染比例也在升高［1］。传统的实验室检测方法往往鉴定周期长、操作繁琐、技术要求高，往往延误临床的诊断和治疗。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)是应用于微生物快速检测的一项新技术。不同的病原菌经MALDI-TOF-MS检测可以形成特异性的指纹图谱，建立这些病原菌的图谱库，将待测病原菌的质谱图与已有质谱图库进行比较，即可确定病原菌种属［2］。为探讨MALDI-TOF-MS用于快速鉴定临床分离的酵母菌的可行性，特进行本研究。

1 材料与方法

1.1 实验仪器设备

MALDI-TOF-MS Auto FlexⅢ及其配套的MALDI Biotyper高通量微生物鉴定系统 (德国Bruker公司)，37℃二氧化碳细菌培养箱 (日本三洋)，1 μL、100 μL、1 mL 移液器 (德国 Eppendorf公司)，VITEK 2-compact全自动微生物鉴定仪 (法国梅里埃公司)。

1.2 菌株

150株酵母菌均为本实验室临床分离株，质控菌株为白念珠菌ATCC 90028、光滑念珠菌ATCC 90030、近平滑念珠菌 ATCC 90018、热带念珠菌ATCC 90874(购于卫生部临检中心)。

1.3 培养基与试剂

胰大豆蛋白胨肉汤 (Tryptic Soy Broth，TSB，OXOID公司)，沙堡弱琼脂 (OXOID公司)，哥伦比亚血琼脂(天津金章公司)，真菌鉴定卡 (法国梅里埃公司)，MALDI-TOF-MS分析基质溶液与校准肽 (Sigma公司)。

1.4 菌株活化

将保存的菌株与质控菌株于TSB肉汤中37℃恢复培养16 h，接种于沙堡弱琼脂平板和哥伦比亚血琼脂平板37℃培养24～48 h。……