王银玲，王亿龙，王齐晖，李花，周立平，李富顺

（中国医科大学附属第一医院1.检验科；2.肿瘤放射治疗科，沈阳 110001）

胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤，其死亡率占恶性肿瘤死亡率的第一位［1］，尽管行胃癌根治术后，5年生存率仅为35%，而且术后转移和复发较为常见，其中腹膜转移最常见，约占总复发的30%～50%［2］。腹腔冲洗细胞学（peritoneal lavage cytology，PLC）检查方法是目前最常用的腹腔脱落细胞学检测方法，但该细胞学检查灵敏性较低，很难早期发现腹腔内脱落的癌细胞［3，4］。

近年来随着寡核苷酸芯片技术的发展，应用甲基化特异的聚合酶链式反应（methylation-specific polymerase-chain reaction，MSP）方法检测微量肿瘤相关基因，使肿瘤微转移的检测成为可能。BNIP3是BCL-2蛋白家族促凋亡成员，属于典型的抑癌基因，该基因启动子区甲基化状态改变是肿瘤发生发展的关键因素之一。本研究应用MSP方法检测胃癌组织及腹腔冲洗液中游离细胞BNIP3基因启动子区甲基化，探讨其在胃癌腹膜微转移诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 临床资料

以我院2008年1月至2010年1月在肿瘤外科手术治疗的80例胃癌患者为研究对象，其中男48例，女32例，年龄31～79岁，平均51.4岁。术前胃镜检查及病理确诊为胃癌，术前均未行放化疗。临床病理指标及PS因素均按日本胃癌病理规约标准［5］，即 P（+）：肉眼腹膜转移；S（+）：显微镜下浆膜受侵。本研究所有患者均自愿加入并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集：术中仔细止血，若已有腹水，直接吸出100 mL，若无腹水，于Douglas窝、左膈下置入16号导尿管注入生理盐水100 mL，轻轻搅动后吸出，于0℃下1 200 r/min离心10 min弃上清液，离心后取沉淀，均分成两份，一部分行伊红染色（HE），另一部分沉渣标本于-80℃下保存以备DNA提取。……