张洪开，徐韬钧，具英花，于爱鸣

（中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，沈阳110001）

非小细胞肺癌 （non-small cell lung carcinoma，NSCLC）的发病率约占肺癌的80%～85%，其发生是多个原癌基因和抑癌基因参与的多基因、多步骤的过程，NSCLC的发生、发展受到细胞内磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/Akt和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）/ERK 等多条信号传递通路的调节［1，2］。肿瘤的发生与细胞周期失控及细胞凋亡机制异常密切相关，FOXO1作为1个抑癌基因，其蛋白可通过磷酸化水平的修饰对其下游多种靶基因进行表达调控，对细胞周期的阻滞、细胞凋亡发挥关键作用。在多种肿瘤中，PI3K/AKT和MAPK/ERK通路异常激活，导致FOXO1蛋白的转录活性受到抑制［3］。文献报道，MAPK通路和PI3K通路是传递细胞增殖信号的2个重要通路，2者之间存在一定程度的相互作用，而FOXO1蛋白正处于这2种信号途径的共同交汇点，参与细胞增殖与凋亡调节［2］。本研究拟探讨人NSCLC中PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路对细胞周期及细胞凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

肺癌A549细胞系购自中国科学院细胞库，DMEM培养基购自美国Gibco公司，PI3K抑制剂LY294002和有丝分裂原活化蛋白激酶的激酶（mitogen-activated protein kinase kinase，MEK） 抑制剂UO126购自 Cell Signaling公司，FOXO1抗体、p-FOXO1（s256） 抗体、Bim 抗体、p27kip抗体购自Bioworld公司，兔抗人GAPDH抗体购自ABmart公司；HRP标记的山羊抗兔IgG抗体购自Santa Cruz公司，PI购自Sigma公司，Annexin-FITC凋亡检测试剂盒购自南京凯基公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组：将细胞接种于6孔板，于37℃、饱和湿度、5%CO2培养箱中，用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养24 h后（细胞融合度约60%），血清饥饿 24 h，分别加入 25 μmol/L LY294002（LY294002 组）、10 μmol/L UO126（UO126组）、25 μmol/L LY294002+10 μmol/L UO126（联合用药组），由于本实验所用抑制剂的溶剂为DMSO，因此选择等体积的DMSO为对照组，作用24 h后收集细胞。……