历文，尹晓慧，段丽丽，陈杰鹏，周雪莹，朱晓琳，牛哲峰，张美侠

（1.中国医科大学药学院临床药理教研室，沈阳 110001；2.齐鲁制药有限公司研发部，济南 250100；3.广东汕头保税区双骏生物科技有限公司应用生物技术研究所，广东 汕头 515071）

紫杉烷类的代表药物紫杉醇（paclitaxel，PTX）是从紫杉树树皮中提取的一种天然植物类抗肿瘤药物。研究证实，PTX是乳腺癌、卵巢癌及非小细胞肺癌的一线和二线治疗药物，并可用于治疗头颈癌、食管癌、精原细胞瘤和复发性非霍奇金淋巴瘤等［1～5］。维康醇是利用高产PTX菌种发酵生产的新型单体化合物，本实验室前期研究结果证实：维康醇对肝癌、胰腺癌、卵巢癌等多种肿瘤细胞株具有增殖抑制作用，可引起细胞周期阻滞并诱导细胞自噬和凋亡，但其具体的作用靶点尚不清楚。DNA拓扑异构酶（topoisomerase）参与DNA复制、转录、重组及修复等所有关键的细胞核内过程，是抗肿瘤研究的热点。本研究拟探讨维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

pBR322 DNA（产品号：D3050）、DNA 拓扑异构酶 Ⅰ（TopoⅠ）（产品号：D2240A）、ATP、（产品号：D4041）购自TaKaRa公司；DNA拓扑异构酶Ⅱα（TopoⅡα）（产品号：T8944-100UN） 购自 Sigma公司；10-羟基喜树碱 （10-hydroxy camptothecin，10-HCPT）由沈阳药科大学提供；依托泊苷（产品号：105007HN）购自山东齐鲁药业有限公司；溴化乙锭（ethidium bromide，EB）购自 Amresco公司；维康醇由广东汕头保税区双骏生物科技有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 TopoⅠ介导的解旋作用及药物的影响：反应体系：pBR322 DNA 0.5 μg，DNA TopoⅠbuffer 2 μL，DNA TopoⅠ1 U（1 U定义为在37℃、30 min内把0.5 μg/50 μL 的 supercoiled pBR322 DNA 转换成100%的松散型酶的活性），0.1%BSA 2 μL，不同浓度（1，5，50 mmol/L）维康醇溶液 2 μL（实验组）或不同浓度（5，50 mmol/L）10-HCPT 2 μL（阳性对照组），灭菌蒸馏水补足至20 μL。37℃反应30 min，加入5 μL的5×反应终止液（0.74%EDTA，50%丙三醇，0.1%溴酚蓝显色液）终止反应。……