潘 博 付文卓 王晓娜 张宝中 米志强 安小平 刘大斌李 存 姜焕焕 陈 斌 童贻刚*

(1.军事医学科学院微生物流行病所国家重点实验室，北京100071;2.中国农业大学动物医学院国家海绵状脑病实验室，北京100193;3.首都医科大学医学实验与测试中心，北京100069)

噬菌体抗体库技术的发展和应用为抗体技术领域带来了巨大的变化，已被广泛应用于生物学、医学等各个研究领域，通过基因工程和噬菌体展示技术的结合，能得到人源化的针对几乎所有抗原表位的抗体，这极大地推动了各种性能优良抗体及多功能抗体融合蛋白的开发和应用［1-3］。噬菌体抗体库模拟了天然抗体库，使得人们可以不经过复杂的免疫过程，而是直接利用抗原就可以从抗体库中筛选出特异性抗体成为可能。它既解决了人源性单克隆抗体的来源困难、人体杂交瘤系统的低效及鼠单抗的动物源性等难题，也使得单克隆抗体的制备变得简单易行，稳定有效，使人单克隆抗体的制备有了突破。但是，此技术目前还有许多问题尚待解决，如在保证抗体库的多样性和呈现效率的同时，如何提高有效库容量、如何在构建抗体库时提高抗体基因的连接效率问题上，还有待进一步解决。为了克服这些问题，本研究拟在本室多年抗体工程研究的基础上，构建含自杀基因的新型、高效抗体库表达载体pDF-D-SacB。

1 材料与方法

1.1 菌株、质粒

噬菌体VCSM13、BSl365菌、表达载体pDF由海军总医院周丽君教授馈赠;Puc19-SacB质粒由军事医学科学院疾病预防控制所黄留玉研究员馈赠;带有抗乙肝病毒表面抗原人Fab段基因的质粒B4HFLF由本室保存。……