刘起胜

(湖南中医药高等专科学校，湖南 株洲 412012)

细胞核增殖抗原(Ki67)、凋亡抑制蛋白(Survivin)的异常表达与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关，但两者在原发性肝细胞癌(HCC)的发生、发展中是否有相关性，目前尚无定论。2001年1月～2010年12月，我们采用免疫组化SP法检测了Survivin、Ki67在HCC组织中的表达，旨在进一步探讨HCC的发生机制。

1 材料与方法

1.1 材料 收集我院手术切除的HCC组织标本60份(肿瘤组)，患者男37例，女23例，年龄23～70(46.43±11.78)岁;均经病理证实且未行化疗、放疗和免疫治疗。另取正常肝组织标本20份作为正常组(肝破裂切除及尸检标本)。两组一般资料无统计学差异。DAB显色试剂盒和S-P试剂盒，兔抗人Survivin、鼠Ki67抗原、SP试剂及DAB显色试剂盒。

1.2 Ki67、Survivin表达检测 采用免疫组化 SP法。实验步骤按试剂盒说明进行操作，以3%H2O2室温孵育5～10min除去内源性过氧化物酶的活性，微波抗原修复，常规免疫组化标记。已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判断标准:在组织切片中，以试剂盒中阳性片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。Ki67以细胞核着棕褐色颗粒为阳性，每张切片随机观察10个具有代表性的高倍视野，计数100个肿瘤细胞的阳性细胞数，以≤10%为(－)，＞10%的细胞着色为阳性［1］。Survivin定位于胞质，少数胞核可同时染色。Survivin均以肿瘤细胞出现棕黄色颗粒为阳性表达。根据阳性肿瘤细胞占肿瘤细胞总数的比例判定阴阳性及其程度:阳性细胞数≤10%为阴性( －)，＞10%为阳性［2］。

1.3 统计学方法 采用SPSS15.0统计软件，计数资料采用χ2检验，两变量之间采用Spearman等级相关分析，以P≤0.05为有统计学意义。……