杨惠新

(鹤山市计划生育服务站，广东鹤山529700)

OFT与MCV联合检测在地中海贫血产前筛查中的应用

杨惠新

(鹤山市计划生育服务站，广东鹤山529700)

目的探讨红细胞渗透脆性试验(Osmotic fragility test，OFT)与平均红细胞容积检测(Mean corpuscular volume，MCV)两种方法联合使用在孕妇产前地中海贫血筛查的优越性。方法选取2010年8月至2011年10在我站产前检查的孕妇312例，抽取静脉血，独立进行OFT、MCV检测和PCR基因诊断。以PCR基因诊断为参照，对比分析OFT、MCV单项检测及联合检测的灵敏度、特异度和准确度等指标。结果地贫基因携带率为7.69%，OFT检测灵敏度高于MCV(91.67%与87.50%)，OFT检测特异度低于MCV(88.54%与92.36%)；OFT和MCV平行联合检测提高检测灵敏度，系列联合检测提高特异度和准确度。结论OFT和MCV联合检测在产前地中海贫血筛查中具有重要价值，其应用有利于预防与控制地中海患儿出生，提高优生优育服务质量。

地中海贫血；筛查；红细胞渗透脆性试验；平均红细胞容积

地中海贫血(地贫)是世界范围最常见的单基因遗传性血红素合成障碍疾病，目前国内外都无有效的治疗方法。在我国，其发病率为3%～8%，广东、广西和海南等是高发地区。广泛开展产前筛查，降低地贫儿出生率是降低该疾病发病率的最有效措施[1]。为优化地贫筛查方法，本站对红细胞渗透脆性试验(Osmotic fragility test，OFT)和平均红细胞容积(Mean corpuscular volume，MCV)两种方法联合使用情况进行评价。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2010年8月至2011年10月到我站进行产前检查单胎妊娠孕妇为研究对象。纳入标准：无地贫检出史；无贫血症状；未接受输血和铁剂治疗。排除标准：有其他已知异常型血红蛋白，特别是HbE型者；失访者；无检测结局资料者。对纳入研究的312例孕妇开展标准产前保健，抽取其外周静脉血样5 ml，添加EDTA抗凝剂保存备用。

1.2 OFT检测用OFT检测红细胞在低渗溶液中的稳定性。取1 ml血样，于1.5 ml离心管中3 000 r/min离心5 min，弃血浆，将10 μl红细胞加入10 ml含0.45%甘油的氯化钠磷酸缓冲溶液中，翻转离心管混合15 s后，记录2 min的溶血动力学情况，间隔时间为2 s，测定溶液620 nm光密度值。OFT值以溶血细胞百分比表示。计算方法：(OD15-OD120)×100/OD15。判断标准：OFT＜60为异常。

1.3 MCV检测MCV测定用Sysmex公司的自动血液分析仪进行，80 fl为MCV的截断值。

1.4 血清铁蛋白检测检测血清铁蛋白以排除缺铁性贫血。利用AXSYM免疫化学发光法进行分析。

1.5 地贫基因诊断检测用TIANGEN试剂盒提取筛查阳性者外周血样DNA，深圳益生堂生物公司的试剂盒鉴定α-地中海贫血和β-地中海贫血携带者。其中，α-珠蛋白基因以PCR产物的琼脂糖凝胶电泳进行分析，β-珠蛋白基因的PCR产物的反向点杂交法进行分析。该方法能对3种常见缺失型和6种非缺失型α-地贫及17种β-地贫进行分析。

1.6 统计学方法检测方法灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值均用百分比表示，不同检测方法指标间的比较采用χ2检验。所有统计学分析在SPSS11.0统计软件中进行。P＜0.05时，差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基因诊断结果312例产前检查孕妇中，α-地贫基因基因携带者有14例，检出率为4.49%；β-地贫基因携带者为8例，检出率2.56%；α/β复合地贫基因携带者2例，检出率为0.6%。地贫基因携带者总检出率为7.69%。

2.2 单项试验检测结果OFT检测的灵敏度=22/ 24=91.67%，特异度=255/288=88.54%，其阴性预测值= 255/257=99.22%，阳性预测值=22/55=40.00%，准确度= 277/312=88.78%。MCV检测的敏感性=21/24=87.50%，特异性=266/288=92.36%，其阴性预测值=266/269= 98.88%，阳性预测值=21/43=48.84%，准确度=287/312= 91.99%。两种检测方法比较，OFT灵敏度较高，而MCV检测特异性和准确度较高，见表1和表2。

表1 OFT检测结果(例)

表2 MCV检测结果(例)

2.3 两种方法联合检测结果OFT与MCV平行检测(OFT或MCV之一为阳性者被视为检测阳性)灵敏度=23/24=95.83%，特异度=253/288=87.85%，阴性预测值=253/254=99.61%，阳性预测值=23/58= 39.66%，准确度=276/312=88.46%。系列检测(OFT和MCV均为阳性者被视为检测阳性)灵敏度=20/24= 83.33%，特异度=288/288=100%，阴性预测值=288/ 292=98.63%，阳性预测值=20/20=100%，准确度=308/ 312=98.72%。与单项检测比较，两项指标平行检测灵敏度显著增高(χ2=4.96，P＜0.05)，系列检测特异度与准确度显著增高(χ2=5.72，P＜0.05)，见表3。

表3 OFT与MCV联合检测结果

3 讨论

地中海贫血常见于我国南方地区，特别是在广东、广西等省，由于目前尚无有效的治疗措施，其预防与控制主要依靠产前筛查。目前，基于PCR的基因诊断技术被认为是地贫诊断的金标准。本研究利用PCR法对312例孕妇进行产前诊断，发现地贫基因携带者总检出率为7.69%，低于广东其他地区的近期报道[2-3]。可能是由于本研究获取样本时间段短，采取的样本量少。基层计划生育服务站在产前筛查中发挥重要作用，是预防地贫儿出生率、保障优生优育的第一道防线。然而，目前国内还有很多计划生育服务站还存在经费短缺、仪器配备相对滞后的现状。为此，如何利用低成本、高效率、快捷、简便的筛查方法是我们亟待解决的课题。

OFT是利用最为广泛的筛查方法，其主要优点在于低成本、易操作，但是由于主要靠手工操作，自动化程度较低。MCV是近年来引进的新筛查技术，主要依靠自动化血液分析仪进行，然而其成本较高。MCV与OFT检测方法比较在国内外报道还存在分歧。Sirichotiyakul等[1]研究发现，OFT检测灵敏度高于MCV，而MCV特异度高于OFT。而王晓忠等[3]的研究认为，MCV的灵敏度高于OFT，OFT的特异性高于MCV。我们将312例孕妇产前筛查结果与基因诊断的结果进行比较，发现OFT检测的灵敏度、特异度和准确度分别为91.67%、88.54%和88.78%；而MCV分别为87.50%、92.36%和91.99%。两者相比，OFT灵敏度显著高于MCV，而MCV特异度和准确度显著高于OFT。该结果与Sirichotiyakul等[1]的结果相似。可能是因为Sirichotiyakul等[1]和我们的调查均采取了横断面研究，参与检查孕妇的基因诊断与OFT、MCV筛查同时独立进行，避免了结果的相互干扰，携带者与非携带者比例也更接近于筛查人群。而王晓忠等[4]是选取已知病例和对照样本进行进行检测，病例与对照数量的比例与实际参与筛查的人群并不一定相符。

对OFT和MCV联合结果进行分析发现，与单项检测结果相比，平行检测灵敏度显著增高，而系列检测的特异性和准确度显著增高。本研究结果提示，OFT检测和MCV检测都不失为孕妇产前地贫筛查的有效方法。在条件相对滞后的检测机构，可以采用成本低廉、操作简单、灵敏度较高的OFT检测法进行筛查。在有条件配备自动化血液分析仪的机构，可根据实际情况利用OFT和MCV平行联合检测，以提高检测的灵敏度，减少漏检；或利用系列联合检测提高特异性和准确度，降低假阳性率。

总之，OFT和MCV联合检测在产前地中海贫血筛查中具有重要价值，其应用有利于预防与控制地中海患儿出生，提高优生优育服务质量。

[1]Sirichotiyakul S,Wanapirak C,Srisupundit K.et al.A comparison of the accuracy of the corpuscular fragility and mean corpuscular volume tests for the alpha-thalassemia 1 and beta-thalassemia traits [J].International Journal of Gynecology and Obstetrics,2009,107: 26-29.

[2]纪妍,林静吟,李旭艳.地中海贫血的产前筛查及产前诊断探讨[J].海南医学,2009,20(9):104-105.

[3]容永忠,李斌,赖兆新,等.地中海贫血产前筛查及基因诊断研究[J].中国优生与遗传杂志,2006,14(5):7-9.

[4]王晓忠,曾学辉,占葆娥.MCV和RBC脆性及血红蛋白电泳在产前筛查地中海贫血的价值[J].中国实验诊断学,2009,13(6): 761-763.

R446.11+3

A

1003—6350(2012)09—095—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.09.041

2011-11-28)

杨惠新(1972—)，女，广东省鹤山市人，主治医师，本科。