王晓兵，田国祥，张薇，张海娟

研究发现，血管内皮细胞通过合成和分泌多种多肽和蛋白质产物参与调控凝血和纤溶，调节血管运动张力，控制血管平滑肌细胞增殖以及炎症反应过程等，是机体内最富活性的细胞之一。血清皮质酮（corticosterone）增多是机体应激时的一个重要表现。热休克蛋白（heat shock protein，HSP）参与蛋白质的合成、折叠、装配、转运和降解等过程，以维持细胞蛋白自稳。但血清皮质酮增多是否对主动脉内皮细胞HSP有影响尚不十分清楚。本研究利用皮质酮对大鼠主动脉内皮细胞进行干预，旨在观察皮质酮对动脉内皮细胞HSP70表达的影响。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂 健康Wistar大鼠（清洁级），体重（120±10）g，购自第三军医大学动物所；皮质酮购自Sigma 公司；抗HSP70抗体购自Santa Cruz 公司。Elx800 型酶标仪为BIO2TEK公司产品；倒置光学显微镜（BX60）为德国Leica 公司产品；PCR仪为Eppendorf 公司产品。

1.2 模型制做及分组 采用大鼠主动脉“环”植块[1]进行大鼠主动脉内皮细胞培养及传代。实验用大鼠主动脉内皮细胞随机分为4组：正常组(未干预组，n=5)、皮质酮干预量效组（包括3组）：0.1μ m 组（n=5）、50μM 组（n=5）和100μM 组（n=5）。量效组加入皮质酮的终浓度分别为：0.1μM、50μ M 和100μ M ，再继续培养2 h、4 h、6 h、12 h、24 h和72 h后，收集细胞，作进一步实验。

1.3 细胞总蛋白提取及蛋白含量测定 采用Bradford法[2]，以牛血清白蛋白（BSA）为测量标准蛋白质，并将其配置成0.5 mg/ml。取5支EP管分别加入0.5 mg/ml BSA 5μl、10μl、15μl、20μl、25μ 1，再加0.15 mmol/L NaCl补足100μl；另取一支EP管加入100μl 0.15 mmo1/L NaCl，作为空白对照。然后，每支EP管中各加入1 ml考马斯亮蓝G-250染液，充分混匀，室温下放置2 min，用1 cm光径的比色杯测595 nm波长处的吸光度（A595），以A595与对应的标准BSA浓度作标准曲线。……