魏 鹏，孙恩成，刘霓红，杨 涛,2，徐青元，秦永丽，赵 晶，冯瑜菲,2，王文世，张翠云,3，吴东来*

（1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001；2.东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨 150030；3.湖南农业大学动物医学学院，湖南长沙 410128）

蓝舌病（Bluetongue，BT）是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒（BTV）引起的经媒介昆虫（如库蠓、伊蚊等）传播的动物传染病。易感动物主要为山羊、绵羊、牛、骆驼等反刍动物，病畜有高烧、黏膜水肿和糜烂等症状。该病致死率为20%～30%，有时甚至高达90%。BTV血清型众多，已鉴定有24个血清型存在。近年来又发现了两个新的血清型，BTV25（瑞士，2008年）和 BTV26（科威特，2011年）[1]。根据不同血清型的Seg-2序列不同，可以将这些血清型又分为若干个核酸亚型（核酸A型到 L 型）[1]。

BTV是迄今为止发现的分子量最大的RNA病毒[2]，其基因组由10个双股正链RNA组成；3个大节段（L1～L3），3个中节段（M 4～M 6）和4个小节段（S7～S10），10个节段基因组分别编码7种结构蛋白（VP1～VP7）和 4种非结构蛋白（NS1、NS2、NS3a、NS3b）[3]。VP6蛋白由S9基因编码，被认为是BTV的解旋酶[4]，全长328个氨基酸。VP6蛋白具有高度的免疫原性，可以诱导高滴度的特异性抗体产生[5]。VP7蛋白由S7基因编码，是BTV群特异性抗原蛋白，由349个氨基酸组成，约占核心蛋白总量的36%[6-7]。制备针对VP6和VP7蛋白的单克隆抗体（MAb）对研究这两种蛋白的生物学特性和建立BT的检测方法具有重要意义。

1 材料和方法

1.1 病毒株、细胞、重组质粒及实验动物 BTV血清型1～24型病毒株、BHK-21细胞和SP2/0骨髓瘤细胞由本实验室保存；以pCI-neo质粒为载体的分别含有BTV1 10个蛋白（VP1、VP2、VP3、VP4、VP5、VP6、VP7、NS1、NS2、NS3）编码基因的真核表达重组质粒由本实验室构建；……