陈素娟，丁彦红，钱 程，柴 茂，彭大新，刘秀梵

（扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室/禽类预防医学教育部重点实验室，江苏扬州 225009）

鸡痘病毒载体表达外源基因已发展到相当成熟的程度，但现有的重组鸡痘病毒疫苗存在着易受母源抗体干扰、免疫效果不如灭活疫苗的问题，以细胞因子作为免疫佐剂可能是增加疫苗保护效力的有效途径之一[1-5]。基于本原理，前期研究构建了共表达鸡IL-6基因和H5亚型禽流感病毒（AIV）HA基因重组鸡痘病毒。

将外源基因插入鸡痘病毒之后，经过细胞传代，能否完整的、稳定的表达插入的外源基因是评价一种能够运用于实际生产的重组基因工程疫苗稳定性和疫苗免疫原性的重要依据[6]。

本研究通过检测重组病毒传代后的增殖特性、外源基因的稳定性及基因表达等方面评价该重组鸡痘病毒的遗传稳定性，为重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性和该疫苗的生产应用提供了实验依据。

1 材料和方法

1.1 病毒株、质粒与细胞 野生型鸡痘病毒疫苗株（w t-FPV）由本室保存；表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-AIH5A由本实验室构建[7]；共表达鸡IL-6和H5亚型AIV HA基因重组鸡痘病毒（rFPV-AIH5AIL6）及单表达鸡IL-6基因的重组鸡痘病毒（rFPV-IL6）由云水丽等构建[1]。SPF鸡胚购自山东家禽所SPF场。

1.2 主要试剂 High Pure PCR Template Preparation Kit、Agarose Gel DNA Extraction Kit购自 AXYGEN公司；细胞用培养基F10、M 199及FITC标记的兔抗鸡IgG购自Sigma公司。

1.3 生长曲线及蚀斑直径的测定 rFPV-AIH5AIL6及对照组病毒rFPV-AIH5A、rFPV-IL6和 w t-FPV以105PFU分别感染鸡胚成纤维细胞（CEF），在37℃、5%CO2条件下培养，分别于24 h、48 h、72 h收获病毒，反复冻融3次，进行蚀斑计数。……