丁晓燕,方廖琼,张 弘,乔 海,王智彪

(重庆医科大学生物医学工程系,省部共建超声医学工程国家重点实验室,超声医学工程重庆市市级重点实验室,重庆 400016)

胚胎早期分化的机理是当今生命科学领域中的重要基础性课题之一,因推测其与肿瘤形成的机理相关,故倍受关注,然而目前尚无定论[1]。在研究胚胎分化或其他相关生命活动时,如判断早期胚胎质量,需要测量其膜电位的变化作为指标。虽然膜电位测定仪在测量膜电位方面的应用已经比较成熟[2],但其用于胚胎细胞时需用酸性台氏液除去透明带,很容易伤害胚胎细胞导致结果不准确,且技术水平要求较高、操作复杂,因此用膜电位测定仪测量胚胎细胞的膜电位有一定的局限性。

电压敏感染料的出现给观测胚胎细胞膜电位的变化提供了一种可能的、操作简便且不破坏细胞结构的方法。DiBAC4(3)是一种膜电位敏感的亲脂性阴离子荧光染料[3],由于它的负离子特性,它会随着细胞膜电位的变化进出细胞膜从而保持膜内外电荷的动态平衡。

DiBAC4(3)已经被用于很多微需氧微生物的研究,其中包括肠贾第鞭毛虫、阴道毛滴虫、胎儿三毛滴虫、六鞭毛虫[4]。但目前尚未见DiBAC4(3)用于胚胎细胞的研究,由于DiBAC4(3)是亲脂性染料,易与蛋白结合[5],而在囊胚期以前的胚胎被主要成分是糖蛋白的透明带包裹,所以用DiBAC4(3)给胚胎细胞染色时可能会受到透明带的影响,而无法准确检测细胞膜电位的动态变化。本实验选取囊胚期以前的三个时期的胚胎,对DiBAC4(3)检测细胞膜电位动态变化的可行性进行研究,为胚胎的膜电位检测探索新的技术方法。……