一氧化氮在乙醇后处理心肌保护中的作用*

2012-08-30胡俊锋姜翠荣关宿东李正红

中国应用生理学杂志 2012年1期

高琴,胡俊锋,于影,姜翠荣,关宿东,李正红△

(1.蚌埠医学院生理学教研室,安徽蚌埠 233030;2.蚌埠医学院第一附属医院呼吸内科,安徽蚌埠 233004)

近年来,一定浓度的乙醇可发挥心肌保护作用已越来越得到共识。临床数据显示,适度饮酒可降低心肌梗死的发生和心肌梗死患者的致死率,减少中风的发生[1]。乙醇心肌保护作用机制涉及腺苷受体、肾上腺素受体和蛋白激酶C系统的激活、线粒体ATP敏感性钾通道的开放、热休克蛋白的表达、激活JNK-1、c-Jun等信号转导发挥抗凋亡作用、促进乙醛脱氢酶2的生成等[2～4]。一氧化氮(nitric ox-ide,NO)是机体内重要的信号转导分子,乙醇的保护作用是否与改变心肌组织NO的释放有关报道甚少。本研究拟在乙醇后处理心肌保护作用的基础上,研究其是否通过改变心肌组织NO发挥作用,进一步分析其与细胞凋亡之间的关系。

1 材料与方法

1.1 实验动物和药品

健康雄性SD大鼠体重200～250 g,清洁级,由蚌埠医学院实验动物中心提供。

左旋-硝基精氨酸甲基酯(L-nitro-argininemethylester,L-NAME),苍术苷(atractyloside,Atr),2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5 triphenyl-tetrazolium chloride,TTC),伊文思兰(Evans blue)为Sigma公司产品。99.7%乙醇(ethanol,EtOH)购自安徽省蚌埠市新科电化试剂厂。NO试剂盒购自南京建成生物制品有限公司。Bcl-2、Bax和β-actin引物均由上海生工生物工程公司合成。引物序列如下Bcl-2上游引物为5'-CTG GTG GAC AAC ATC GCT CTG-3',下游引物为5'-GGT CTG CTG ACC TCA CTT GTG-3',产物长度228 bp;Bax上游引物为5'-GGA TCG AGC AGA GAG GAT GG-3',下游引物为5'-TGG TGA GTG AGG CAG TGA GG-3',产物长度 464 bp;β-actin 上游引物为5'-GAT GGT GGG TAT GGG TCA GAAGGA C-3',下游引物为5'-GCT CAT TGC CGA TAG TGA TGA CT-3',产物长度630 bp。改良Krebs-Henseleit(K-H)液成分(mmol/L):NaCl 118.0,KCl 4.7,K2PO41.2,MgSO41.2,NaHCO325.0,CaCl21.25,葡萄糖11.0,pH 7.3～7.4。