刘东璞,卢凤美,姚海涛,孟庆媛,盛延良,尹兴忠,王 抒

(佳木斯大学司法鉴定中心,黑龙江 佳木斯 154007)

原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)发病率位居全身恶性肿瘤第五,其死亡率列第三位,对人们的身体健康构成严重影响。目前公认乙型肝炎病毒(HBV)和黄曲霉毒素 B1(Aflatoxin B1,AFB1)与肝癌发生关系密切,其中AFB1已被世界卫生组织确定为人类第一类己知致癌物,是人类谷物和动物饲料中最常见得真菌毒素。本实验旨在建立AFB1诱导的大鼠肝癌模型。

1 材料与方法

1.1 实验动物

40只健康雄性 SD大鼠,体重180～220g,由佳木斯大学动物实验中心提供。

1.2 实验方法

将 40只 SD大鼠随机将其分为两组:(1)AFB1组(25只),于第三周开始腹腔注射 AFB1:第3～16W:200μ g/kg体重 ,3次 /W;第 22～ 30W:100 μg/kg体重 ,2次 /W;第 35～45W:100 μg/kg,1次 /W。

(2)对照组 (15只),于第一周开始饲食正常饲料直至实验结束。不给 AFB1处理。

分别于实验第18W、32W、55W于大鼠大腿内侧近腹股沟处经股静脉穿刺抽血约1.5mL,离心后留取血清标本于-40℃冰箱保存。

第60W断颈处死全部大鼠,解剖大鼠常规留取有肿块的肝组织及数块肿块旁肝组织,所取肝组织切取一部分放入10%中性福尔马林溶液内固定24h后常规石蜡包埋,用于HE染色及免疫组织化学染色;剩余部分立即投入液氮速冻后再转入-80℃冰箱保存备用。血清按照试剂说明书以酶联免疫吸附法(ELISA)检测 AFP水平。

2 结果

2.1 肝癌模型的成功率

实验结束(第 60W)时 ,AFB1组有效动物数为25只,20只发生恶性肿瘤 ,其中2只为胆管上皮细胞癌,其余为肝细胞肝癌 (HCC);PHC发生率为80%(20/25)。对照组 15只,无肿瘤发生。

2.2 肝癌发生过程中大鼠血清 AFP的变化

酶联免疫吸附法 (ELISA)检测大鼠血清 AFP水平,随着模型组 AFB1诱导周数的增加肝脏体积增大,肝细胞弥漫性脂肪变,血清 AFP明显升高 (P＜0.05)。……