姜 伟,王玉清,刘远光,宿星杰,齐艳秀,张 剑,曹丽辉,王冬兰

(佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003)

免疫排斥反应是引起高危角膜移植手术失败的主要因素(发生排斥率≥60%)。雷帕霉素(Rapamycine,RAPA)作为强效免疫抑制剂已在器官移植中获得广泛应用,但穿透性角膜移植术后全身应用 RAPA副作用大,治疗费用昂贵;而RAPA一般滴眼液难于在眼内达到有效的治疗浓度[1]。因此,探索 RAPA局部用药新剂型,对高危角膜移植术后免疫排斥反应的防治具有重要意义,为临床治疗提供新思路。

1 材料和方法

1.1 RAPA纳米粒的制备与药物的配制

由天津大学材料工程研究学院将 RAPA和聚乳酸/胆固醇改性壳聚糖(PLA/Cs-Chol)混合,制成 RAPA纳米粒,PLA和 Cs-Chol的重量比为1:5,颗径平均为300纳米 ,以灭菌注射用水配置成0.5%RAPA纳米粒滴眼液。

1.2 动物分组与滴眼

体重 2～ 3kg健康新西兰大白兔 40只,查无眼病,随机分为 实验 组 与对 照组 ,每组 20只 ,分别给 药后 15、 30、 60、 360、720min取材进行观察。用微量取样器给药:对照组每眼结膜囊内单次滴0.5%RAPA滴眼液 50 μL;实验组每眼结膜囊内单次滴0.5%RAPA纳米粒滴眼液50μL。

1.3 组织样品收集

滴眼后分别于不同时间点用带27号针头一次性注射器抽取房水,精密吸取100μL。将家兔耳缘静脉注射消毒空气处死,用0.9%氯化钠溶液冲洗眼球后,取角膜,滤纸吸干并称重。所有样品以液氮速冻后储存于-80℃低温冰箱备用。药物浓度采用高效液相色谱法(HPLC)测定。

1.4 样品处理方法

取房水100μL加6%高氯酸甲醇溶液 100 μL混匀,4000r/min,离心 15min,取上清液 40μL注入液相色谱仪中 ,测定峰面积。以峰面积代入回归曲线,求得所测试样品浓度。……