菅辉玲， 程 江， 黄 瑾， 高 蕊，3

neuritin(Nrn1)基因是1996年Nedivi等通过大鼠光刺激诱导实验，在视皮质中首次发现并报道的可塑性相关候选基因15(CPG15)。它是一种与神经系统可塑性密切相关的神经营养因子，能够促进神经突起的快速生长与分支，在神经系统受损后发挥重要的再生修复作用［1～3］。研究表明Nrn1蛋白能促进大鼠急性脊髓损伤后伤区轴突再生，并能促进大鼠后肢运动功能的恢复，部分改善运动神经元轴突的缺失［4～6］。Nrn1基因 mRNA 的3’非编码区(UTR)作为其mRNA的重要组成部分，可能与microRNA(miRNA)结合而被引导发生降解或翻译受阻。miRNA是一类长度约18-25nt的内源性的非编码 RNA，研究表明它与神经变性疾病相关［7，8］。

MiR-124能通过下调不利于神经元发育的众多基因，诱导神经元的分化，调控轴突外生并促使其向正常功能发育［9～11］。Lee 等［12］在小鼠大脑中动脉短暂梗阻动物模型脑组织基因表达差异的筛查中发现部分miRNAs可能在神经元的损伤后修复中发挥重要作用。但是目前在国内外还尚未见到关于miRNA调控Nrn1基因的研究报道。

本实验室前期采用solexa深度测序技术对脑缺血再灌注后2w及假手术大鼠脑组织的miRNA进行测序、比对和差异分析发现了部分差异表达的miRNAs，而且部分miRNAs与Nrn1蛋白表达呈此消彼长的现象［13，14］。

基于上述背景，为进一步验证这些可能种子miRNA对Nrn1基因的调控作用，需对Nrn1 mRNA的3’UTR区进行克隆，并对序列进行生物信息学分析。本研究以大鼠为实验研究对象，采用PCR技术克隆大鼠3’UTR区，并进行生物信息学分析;同时利用miRada软件对3’UTR区miRNA可能结合靶标位点进行预测，期冀发现与 Nrn1密切相关的miRNA。……