马歌丽 韩甜甜

（郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州450002）

β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase，EC3.2.1.26)又称蔗糖酶或转化酶，具有广泛的受体特性。在低浓度的蔗糖溶液中，β-呋喃果糖苷酶主要催化蔗糖水解生成果糖和葡萄糖；在高浓度的蔗糖溶液中，β-呋喃果糖苷酶可催化转糖基作用，在蔗糖的果糖基上通过β-2，1糖苷键连接1～3个果糖而形成低聚果糖；β-呋喃果糖苷酶也能以蔗糖和乳糖为底物，将蔗糖分子中的果糖基优先转移到乳糖分子上，催化合成低聚乳果糖。除此之外，β-呋喃果糖苷酶还能催化合成糖苷类化合物、生产β-寡聚葡萄糖等[1]。

β-呋喃果糖苷酶广泛存在于生物界，主要来源于节杆菌、酵母菌、黑曲霉、米曲霉、日本曲霉等微生物[2-6]，但现有菌株产生β-呋喃果糖苷酶的活力普遍较低，因此，选育高产β-呋喃果糖苷酶菌株具有实际意义。本试验对黑曲霉进行紫外诱变，筛选出高产β-呋喃果糖苷酶突变菌株；并采用单因素和响应面分析试验对该突变菌株的发酵培养基进行了优化。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种

黑曲霉由郑州轻工业学院生物工程实验室保藏。

1.1.2 培养基

PDA培养基：土豆20%、蔗糖2%、琼脂1.5%～2%。

初筛培养基：土豆20%、蔗糖2%、琼脂1.5%～2%。

种子培养基:蔗糖3%、酵母膏0.5%、KH2PO40.2%、NaNO30.3%、MgSO4·7H2O 0.05%、FeSO4·7H2O 0.001%，pH值自然。

初始发酵培养基：蔗糖5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.5%、KH2PO40.2%、NaNO30.3%、MgSO4·7H2O 0.05%、MnCl2·4H2O 0.03%、FeSO4·7H2O 0.001%，pH 值自然。

1.2 试验方法

1.2.1 紫外诱变

1.2.1.1 黑曲霉孢子悬液的制备

将保存的黑曲霉菌种接种于PDA斜面培养基上，30℃培养，待孢子成熟时，用无菌生理盐水洗掉孢子，制成孢子浓度为106～107个/ml的孢子悬液。

1.2.1.2 紫外诱变处理