HPLC 法测定醋酸泼尼松龙微乳中醋酸泼尼松龙的含量

2012-08-06吕青志李珂珂刘德胜张晓帆滨州医学院药学院山东烟台264003

中国药房 2012年4期

吕青志，李珂珂，刘德胜，张晓帆（滨州医学院药学院，山东烟台 264003）

醋酸泼尼松龙（Prednisolone acetate，PA）为肾上腺皮质激素类药物，具有抗炎、抗过敏和抑制免疫等多种药理作用，临床主要用于活动性风湿、类风湿性关节炎的治疗。目前，国内该药的制剂形式有醋酸泼尼松龙注射液、醋酸泼尼松龙片和醋酸泼尼松龙滴眼液。由于长期全身给药易引起库欣综合征、并发感染等不良反应，患者顺应性较差[1]。为此，笔者将醋酸泼尼松龙制备成微乳经皮给药制剂，以提高其经皮渗透速率和经皮渗透量，维持病变部位较高的药物浓度，以减少全身治疗引起的不良反应，提高患者的顺应性[2，3]。同时，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定微乳中醋酸泼尼松的含量，药物与辅料及溶剂得到了良好的分离。

1 仪器与试药

600-2489型HPLC仪（美国waters公司）；ODS-2 C18柱（大连依利特有限公司）；EL-204型高精度电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；SH23-2型恒温磁力搅拌器（上海梅颖浦仪器仪表制造公司）；KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

醋酸泼尼松龙（河南利华制药有限公司，含量：99.4%，批号：K07A20091003）；醋酸泼尼松龙对照品（中国食品药品检定研究院）；醋酸泼尼松龙微乳（滨州医学院药学院自制）；空白微乳（滨州医学院药学院自制）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：甲醇-水（65∶35）；检测波长：243 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱温：25 ℃；进样量：20 µL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液的制备精密称取醋酸泼尼松龙对照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备精密称取醋酸泼尼松龙微乳0.1 g，置于100 mL容量瓶中，加甲醇超声破乳（40 W，15 min），甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 空白微乳的制备精密称取空白微乳0.1 g，置于100 mL容量瓶中，加甲醇超声破乳（40 W，15 min），甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适用性试验

分别制备一定浓度的醋酸泼尼松龙对照品溶液、空白微乳破乳液和醋酸泼尼松龙微乳破乳液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，色谱见图1。由图1可见，醋酸泼尼松龙各组分间分离良好，对照品的保留时间约为6.6 min，空白微乳只在3 min之前有色谱峰，表明辅料和溶剂对药物含量的测定无干扰。

2.4 线性关系考察

精密量取对照品贮备液适量，加甲醇稀释成浓度为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 µg·mL－1的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析。以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程A＝44 755C－5 710.2（r＝0.999 9）。结果表明，醋酸泼尼松检测浓度在0.5～10.0µg·mL－1范围内与峰面积积分值线性关系良好。

图1 高效液相色谱图A.醋酸泼尼松龙对照品；B.空白微乳；C.醋酸泼尼松龙微乳；1.醋酸泼尼松龙Fig 1 HPLC chromatogramsA.prednisolone acetate control；B.blank microemulsion；C.prednisolone acetate microemulsion；1.prednisolone acetate

2.5 精密度试验

取“2.2”项下的对照品贮备液（1.0、3.0、10.0 µg·mL－1）适量，各重复进样5次，测得日内精密度和日间精密度，结果见表1。由表1可知，3个浓度的日内、日间精密度RSD均＜2%，表明该方法精密度良好。

表1 日内和日间精密度试验结果（n＝5）Tab 1 Result of intra-day and inter-day RSD tests

2.6 稳定性试验

取“2.2”项下的对照品贮备液（3.0 µg·mL－1）适量，室温放置，按“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样测定。结果，RSD＝1.28%，表明样品在24 h内稳定性良好。

2.7 加样回收率试验

精密称取醋酸泼尼松龙微乳40 mg（约相当于醋酸泼尼松龙0.4 mg），共9份，置于100 mL容量瓶中，按照样品中醋酸泼尼松量的80%、100%、120%分别精密加入对照品贮备液（醋酸泼尼松龙的浓度为0.2 mg·mL－1）1.6、2.0、2.4 mL，按“2.2”项下方法制备溶液，经0.22 μm微孔滤膜滤过，进样分析，加样回收率试验结果见表2。

2.8 样品含量测定

取3批（每批5份）醋酸泼尼松龙微乳样品适量，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，经0.22 μm微孔滤膜滤过，进样分析，记录峰面积并根据标准曲线计算供试品中醋酸泼尼松龙的含量（标示量%），结果见表3。

2.9 稳定性试验

取3批醋酸泼尼松龙微乳样品灌封于安瓿中，室温（25℃）放置，于0、10、20、30 d取样，观察外观，测定放置前、后的药物含量，结果见表4。

表2 加样回收率试验结果Tab 2 Results of recovery tests

表3 样品含量测定结果（标示量%）Tab 3Results of content determination（labeled amount%）

表4 稳定性试验结果（±s，n＝5）Tab 4Result of stability test（±s，n＝5）

时间/d 0 10 20 30外观无色、透明无色、透明无色、透明无色、透明含量/%100.2±1.5 99.6±0.7 99.3±1.3 98.9±1.1黏度/mm2·s－1 7.19±0.13 7.24±0.32 7.33±0.45 7.34±0.37

由表4可知，室温保存30 d时样品色泽、澄明度未变，无分层、絮凝现象，含量无显著变化，表明稳定性较好。

3 讨论

3.1 破乳方法的选择

微乳含量的测定涉及破乳提取药物的过程，破乳的方法有物理法和化学法。物理法包括加热和高压电破乳，前者难以在短时间内破乳，后者不适于实验室应用。本研究采用化学破乳法，通过加入破乳剂破坏乳化剂或界面膜改变分散体系的界面性质以达到破坏微乳结构的目的[4]。采用甲醇作为破乳剂，所得溶液澄清透明，且不干扰测定，符合检验要求。