苏桂源，孙 凯，李国新，余 江

(南方医科大学南方医院，广州510515)

微小RNA(miRNA)是真核生物中一类长约22个核苷酸的非编码小分子RNA，于转录后水平调控靶基因表达，其作为一类潜在的癌基因或抑癌基因参与多种肿瘤的发生发展过程［1～3］。miRNA-338-3p(miR-338-3p)是新近发现的一种miRNA，其在结直肠癌中的表达情况及其调控靶目标的表达情况尚未见报道。Smoothened(SMO)蛋白是Sonic hedgehog(Shh)信号通路中的一个关键跨膜蛋白，具有开关该信号通路的作用;Shh信号通路异常激活可促进肿瘤细胞增殖、迁徙以及新生血管的形成［4，5］。本研究观察了结直肠癌组织中miR-338-3p及SMO的表达情况，为探讨两者可能的内在调控关系提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2010年9～12月南方医科大学南方医院收治的结直肠癌患者30例，男16例，女14例;年龄(58.8±11.2)岁。其中结肠癌19例，直肠癌11例。患者接受手术治疗时，留取癌组织，同时取距离癌肿5 cm的肠黏膜(癌旁组织)及距离癌肿10 cm以上的肠黏膜(作为正常对照)。全部患者术前未接受放化疗。标本采集后用DEPC水处理并快速置液氮中冷冻，－80℃保存。

1.2 引物设计与合成 自miRNA Base数据库(http://microrna.sanger.ac.uk/)和 Genebank 查找基因序列，用Primer-Express 2.0软件进行引物设计。miR-338-3p及内参照RNU6B由GeneCopoeia公司设计合成。SMO上游引物为5'-TTACCTTCAGCTGCCACTTCTACG-3'，下游引物为 5'-GCCTTGGCAATCATCTTGCTCTTC-3'，扩增片段长 322 bp;内参照GAPDH上游引物为5'-GCTCTCCAGAACATCATCCCTGCC-3'，下游引物为 5'-CGTTGTCATACCAGGAAATGAGCTT-3'，扩增片段长346 bp;上述引物由上海英潍捷基公司合成。

1.3 miR-338-3p的检测 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术。用Trizol抽提标本组织中的总RNA，使用Beckman Coulter DU800核酸蛋白分析仪测定 RNA浓度，RNA的 A260nm∶A280nm≥1.8，经甲醛变性凝胶电泳后取 28S、18S泳道的RNA条带进行鉴定，实验所用RNA具备较高的纯度及完整性。……