孙桂彬，杨景国，李永华，陈 哲，汪 威，韩樱松

(北京市普仁医院，北京100062)

肿瘤抑制基因与PTEN具有双特异性磷酸酶活性，通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡等抑制肿瘤的发生发展，并能多途径地抑制肿瘤细胞的浸润和转移。p16既是正常细胞周期的有效调控者，又是抑制肿瘤生长的关键因子。当p16基因发生突变、缺失时，p16蛋白不能正常表达，使细胞增殖失控而发生癌变。本研究用利用免疫组化法对胃癌组织中的PTEN和p16蛋白进行了检测，观察其表达变化并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2000～2008年北京市普仁医院手术治疗的胃癌患者78例，男55例，女23例;中位年龄58岁(29～76岁)。留取手术切除的所有胃癌组织，同时取正常胃黏膜组织21例(取自上述胃癌患者行胃切除的近侧断端胃黏膜，断端均距癌组织5 cm以上，组织学检查为正常胃黏膜)。所有病例手术前未接受化疗、放疗或免疫治疗。

1.2 PTEN和p16蛋白的检测 实验所用鼠抗人PTEN多克隆抗体和p16单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品。SP染色试剂盒和DAB显色剂购自北京中杉技术有限公司。标本石蜡包埋后常规4 μm厚连续切片，每份均行HE染色和免疫组化SP染色，光镜观察。用已知阳性的胃癌切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。PTEN 蛋白定位于细胞质，呈淡黄色、棕黄色、棕褐色颗粒;p16蛋白定位于胞质，呈淡黄色、棕黄色、棕褐色颗粒，且其着色强度高于背景非特异性染色。每份切片随机选取5个高倍视野进行观察、计数。按细胞染色强度及阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比计分:细胞无染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;阳性细胞数 ＜5%为0分、5% ～25%为1分、26% ～50%为2分、＞50%为3分。……