(无锡市第三人民医院，江苏无锡 214000)

据美国卫生部门统计显示，因肝癌而死亡的人数位居肿瘤导致死亡人数的第二位。肝癌的早期症状不明显［1，2］，因此寻找特异性的肿瘤表面标志及分子靶点具有非常重要的意义。肿瘤干细胞被认为是肿瘤始动、复发、转移、耐药的罪魁祸首。自2011年初至今，我们检测了肝癌干细胞及肝癌普通细胞相关标志物的表达差异，探讨肝癌干细胞的生物学行为特点，旨在为其鉴定分选及其生物学特征的研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 人肝癌细胞系细胞株MHCC-97H(购自中科院上海细胞库)，细胞培养试剂DMEM-F12培养基及胰蛋白酶(购自美国Thremo Fisher公司)，小鼠抗人 CD133Ig，小鼠抗人 Ki67Ig，小鼠抗人MMP9Ig，小鼠抗人MDR1Ig(购自武汉博士德生物工程有限公司)。荧光显微镜。

1.2 细胞培养体系 ①普通培养体系:将MHCC-97H细胞培养于含l0%胎牛血清的DMEM-F12培养基中。②干细胞克隆增殖体系:培养于普通培养体系中的MHCC-97H细胞经磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2遍，将其培养于含10 μg/L碱性成纤维生长因子(bFGF)、20 μg/L 表皮生长因子(EGF)、5 μg/L 胰岛素、2.75 g/L 转铁蛋白、2.75 μg/L 硒的无血清DMEM-F12培养基中，每10天换液1次。将相同来源的MHCC-97H细胞系分别培养于两种培养体系中，放人含5%CO2的37℃恒温培养箱，2 d换液1次。

1.3 观察项目

1.3.1 细胞生长状况及肿瘤细胞表面标志物表达采用免疫荧光法测定。取肝癌干细胞球及对数期肝癌细胞，分别接种于含有5 mL相应培养体系的24孔板中，培养12 h;4%多聚甲醛溶液常温下固定细胞克隆1 h;弃固定液，用PBS漂洗3次，每次15 min;用封闭液于37℃下封闭l h;弃废液，用PBST(0.02 mol/L的PBS中加……