赵 卉 何少林 林 静 马旭明 李大主

(华中科技大学同济医学院协和医院心内科，武汉430022)

动脉粥样硬化(AS)是一种慢性免疫炎症性疾病［1］。AngⅡ作为肾素-血管紧张素系统(RAS)的主要成分，能够刺激血管细胞产生细胞因子和生长因子通过受体介导方式及复杂的胞内信号通路参与AS的炎症反应［2］，但具体机制尚不十分清楚。我们的研究发现树突状细胞(DC)的激活在AS形成发展过程中起着重要作用［3］。最近研究表明胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是DC成熟活化的重要刺激因子［4，5］。支气管平滑肌细胞在多种炎症因子刺激下可表达 TSLP，并介导支气管炎症反应［6］。AngⅡ是否通过刺激血管平滑肌细胞(VSMC)表达TSLP而引发AS炎症反应尚无报道，本文就此进行探讨。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 DMEM高糖培养基(无碳酸氢钠)及新生牛血清购于Gibco公司，培养基按说明书配制，4℃保存，血清使用前56℃水浴30分钟灭活补体后分装，-20℃保存;AngⅡ、PDTC购于Sigma公司;DMSO购于上海华美生物工程公司;胰蛋白酶购于Amersco公司;TSLP ELISA试剂盒购于R＆D公司;TSLP免疫组化试剂的一抗购于ProSci公司;两步法抗兔/鼠通用型免疫组化试剂盒购于基因科技(上海)公司;EMSA试剂盒购于美国Pierce公司。

1.2 方法

1.2.1 VSMC培养 取 Sprague-Dawley雄性大鼠(150～180克，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心)胸主动脉，去除血管内膜和外膜，将中膜剪成1 mm2大小的组织块，贴片于培养皿底部，用含20%新生牛血清的DMEM培养基，置37℃、5%CO2孵育箱中培养细胞。细胞生长融合后，用0.125%胰蛋白酶消化传代。实验选用第4～10代培养细胞。倒置显微镜下见传代细胞呈典型的“峰-谷”样生长，免疫细胞化学染色见细胞内α2肌动蛋白呈阳性，确定为平滑肌细胞。……