欧春培 利春叶 李晓文 陈国艺 贾赛雄

南方医科大学附属深圳宝安医院上肢显微外科，广东 深圳 518101

缺血-再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）所致人体各个组织和器官的损伤在临床并不少见，包括术中为避免出血人为阻断组织和器官的供血后再灌注的损伤。如骨科常用止血带限时地压迫主要供血血管而达到四肢手术和创伤出血中的止血，临床中笔者观察到手外伤患肢正常使用止血带，缺血再灌注后未受伤手指指甲也会出现畸形生长，其机制尚不清楚。本研究在动物模拟实验的基础上探讨使用止血带后缺血再灌注对甲床的损伤及其相应的作用机制。

1 材料与方法

1.1 试剂

超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒和TUNEL细胞凋亡检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，Trizol购自分子探针公司，RT-PCR和荧光定量检测Real Time试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司。

1.2 实验动物

健康雄性大耳白兔 50只，体重（6.0±1.2）kg，购自中山大学动物实验中心。动物随机分为5组：对照组、缺血30、60、90、120 min组，每组各 10只。

1.3 缺血再灌注动物模型的制备

3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（1 mg/kg），固定实验组大耳白兔，于右后肢根部上止血带，松紧度以腘动脉搏动消失为准，分别于缺血30、60、90、120 min再灌注1 h后剥离甲板，用于后续试验。

1.4 SOD活性的测定

手术取出的局部甲床组织匀浆，严格按照试剂盒的说明书操作，采用分光分析法检测标本中超氧化物歧化酶（SOD）活性[1]。

1.5 组织TNF-α基因表达的荧光定量PCR检测

手术取出的局部甲床组织匀浆，按照Trizol和反转录试剂盒说明书操作，提取细胞总RNA和反转出cDNA的第一链，按照Real-Time试剂盒说明书操作，使用ABI 7000荧光定量PCR仪检测TNF-α基因的表达。……