以鸡胸软骨为原料提取硫酸软骨素的研究
2012-07-27李燕妮曹红光
化学与生物工程 2012年7期
李燕妮,曹红光
(1.滨州医学院药学院,山东 烟台264003;2.烟台安德利果胶股份有限公司,山东 烟台264000)
硫酸软骨素是一种具有重复二糖单元结构的粘多糖,这些二糖是硫酸化和/或未硫酸化的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺。软骨的蛋白聚糖单体含80~100 个硫酸软骨素链,它与连接蛋白和透明质酸形成大而可逆压缩的流体型聚集物,这些聚集物是软骨能够以最小变形来对抗大负荷必不可少的物质。
临床研究证明硫酸软骨素治疗骨关节炎有较好的疗效[1]。在美国和欧洲,硫酸软骨素不仅直接用作药品[2];还广泛用于治疗动物(如狗和马)的关节炎;同时也是一种发展迅速的膳食补充剂。硫酸软骨素的来源通常是牛气管软骨和鲨鱼软骨[3],无法满足迅速增长的需求,因此开发其它硫酸软骨素来源非常重要。鸡胸软骨是一种有潜力的来源,不仅产量很大,且容易收集,便于生产加工。作者在此以鸡胸软骨为原料提取硫酸软骨素,拟为拓宽硫酸软骨素来源提供参考。
1 实验
1.1 原料、试剂与仪器
鸡胸软骨。
木瓜蛋白酶、硼氢化钠、软骨素ABC酶、角质素、角质素酶、鲨鱼硫酸软骨素, Sigma公司。所用试剂均为分析纯。
高速冷冻离心机,德国Heraeus公司;1260 Infinity型液相色谱仪,安捷伦公司。
1.2 方法
1.2.1 硫酸软骨素的提取
取鸡胸软骨匀浆后在60 ℃下用木瓜蛋白酶(用量为4 mg·g-1)水解3 h除去蛋白质,为了水解彻底,再次加入木瓜蛋白酶(用量为4 mg·g-1)水解3 h。将水解液离心除去不溶物,在上清液中加入氯化钠溶液(用量为20 mg·mL-1),缓缓加入2 BV 95%乙醇沉淀多糖,静置4 h,离心,收集沉淀的多糖,溶解后同法再次沉淀,用乙醇洗涤后烘干,测定硫酸软骨素含量和蛋白质含量。……
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