来氟米特联合苯那普利对慢性抗thy1 肾炎大鼠蛋白尿及肾功能的影响
2012-07-16张承英张建荣耿燕秋
张承英,张建荣,耿燕秋,丁 韬
抗Thy1 肾炎模型是模拟人类肾小球疾病建立的以抗Thy1 抗原单克隆抗体诱导的实验性系膜增殖性肾小球肾炎动物模型。来氟米特是一种新型的免疫抑制药,其活性代谢产物A771726 可选择性地抑制二氢乳清酸脱氢酶(DHOPH)的活性,阻断嘧啶的从头合成,发挥抗增殖作用[1]。来氟米特还可以抑制各种炎性反应刺激诱导的NF-κB 的活化,下调NF-κB 调控基因的表达,发挥抗炎和抑制免疫的作用[2]。本研究拟以血管紧张素转换酶抑制药盐酸苯那普利为对照,观察来氟米特及来氟米特联合苯那普利对慢性实验性系膜增殖性肾炎的疗效。
1 材料与方法
1.1 OX7 抗体的制备与鉴定
1.1.1 OX7 抗体的制备 复苏OX7 杂交瘤细胞,由解放军总医院全军肾脏病研究所提供,用10%的1640 培养液培养生长至细胞密度达到107/ml,pH值7.0 左右,1 ∶2 ~4 传代(传代后细胞密度达到105/ml),加入10 ml 10%的1640 培养液,培养48 h(细胞上清液变为黄色,细胞密度达到107/ml,pH 7.0),收集细胞上清,用minipore 离心柱离心(4℃,3000 r/min,30 ~45 min),浓缩10 ~15 倍,收集浓缩液,用BCA 法测定蛋白浓度,-70 ℃冻存。
1.1.2 OX7 抗体的鉴定 用正常大鼠冷冻切片,采用间接免疫荧光法对OX7 抗体进行鉴定。
1.2 动物模型的制备
1.2.1 实验动物 健康雄性Wistar 大鼠60 只(清洁级),体重150 ~200 g,由解放军总医院实验动物中心提供并喂养。动物室保持12 h 昼夜循环,室温控制在19 ~29℃,湿度40% ~70%,动物自由摄取水和食物。
1.2.2 动物模型的制备 60 只大鼠适应性饲养1周后进行单侧肾切除。单侧肾切除后将大鼠随机分为5 组:单纯肾切组、模型对照组、来氟米特治疗组、苯那普利治疗组及来氟米特联合苯那普利治疗组(联合治疗组),每组12 只。……
