安徽农业大学生命科学学院 张宽朝 全明吉

黑豆，为豆科植物的种子，亦称乌豆、黑大豆。现代药理研究证实，黑豆含有丰富的蛋白质、卵磷脂、脂肪、维生素以及黑色素、烟酸等，具有抗氧化、增强免疫力、抗炎、抗癌、防止脂质过氧化等重要功能（王敏等，2008；陈颖和徐巍，2008）。多酚氧化酶（PPO）是自然界分布较为广泛的一种氧化还原酶，是一类含铜元素的金属蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中。本试验以黑豆为试验材料，对其中的多酚氧化酶进行了分离纯化及酶学特性研究，以期为进一步研究多酚氧化酶的基本特性和调控黑豆的加工过程提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 黑豆：庐州黑豆，市售，经剥皮后用粉碎机破碎，备用。DE-52为Whatman分装；透析袋为Usa分装；PEG-20000为Ameresco分装；硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、邻苯二酚、PVP、EDTA、Tris、氢氧化钠、氯化钠、考马斯亮蓝G-250等均为国产分析纯。SP-722E分光光度计（上海光谱仪器有限公司），TGL-20M台式高速冷冻离心机 （湘仪离心机仪器有限公司），MC99-3自动液相色谱分离层析仪（上海沪西分析仪器厂有限公司），粉碎机 （天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 黑豆多酚氧化酶酶活性测定 取2支试管，一支作为空白管加入3 mL 1/15 mol/L pH 6.8的磷酸盐缓冲液，另一支加2 mL 1/15 mol/L pH 6.8的磷酸盐缓冲液，1 mL 0.1%邻苯二酚，摇匀。2支试管同时于50℃恒温预热5 min，分别加入0.5 mL酶液，立即计时，摇匀。准确恒温反应15 min，迅速取出于420 nm处比色读取 OD值 （张雅芬等，2005）。PPO活力单位定义为 ：每分钟OD值变化0.001为一个酶的活力单位（U）。

1.2.2 黑豆多酚氧化酶的……