东北农业大学 杨 琼 孙满吉＊ 黄立敏 王 寅 朱继红 徐春桃 李建平

秸秆的粗纤维含量高，粗蛋白质很低，导致其质地粗硬，适口性差，不易消化，家畜采食量低，饲用价值不高 （李延云，2006；冯仰廉和张子仪，2001；Kayongo，1993）。 利用微生物产生的纤维素酶降解纤维素，具有条件温和、产物产率高和无二次污染等特点 （徐广等，2007； 张红莲，2004），因此，发展和利用产高活性纤维素酶的微生物对纤维素原料进行分解转化是一种有效的资源利用途径（肖舸等，2004；Tomme，1995）。反刍动物瘤胃内存在大量的细菌、纤毛虫和真菌，能够利用饲料中的纤维素、半纤维素，进行分解和发酵，转化为宿主的营养物质和能量（刘敏雄，1991）。因此，本试验以玉米秸秆为主要原料，采用体外培养固态发酵方法，旨在从奶牛瘤胃液中分离筛选出一株纤维素酶高产菌株，并对其产酶条件进行优化，最终为高效利用秸秆资源提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 培养基 富集培养基 （100 mL）：CMC-Na 1.0 g，K2HPO40.1 g，MgSO4·7H2O 1.01 g，MnSO45×10-5g；蛋白胨 1.0 g，酵母膏 1.0 g，pH 6.4 ～ 6.8。

分离筛选培养基：羧甲基纤维素钠5 g，K2HP041 g，NaN033 g，MgSO40.5 g，琼脂 17 g，蒸馏水l000 mL，pH 6.4～6.8；斜面活化保藏培养基：去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂 17 g，蒸馏水 1000 mL，pH6.4～ 6.8。

玉米秸秆培养基：玉米秸秆粉3 g，蒸馏水100 mL（固体培养则不加水），pH自然。

1.1.2 溶液 配制3，5-二硝基水杨酸（DNS）显色剂，0.2 mol/L 磷酸缓冲液（pH=6.0），1 mg/mL 的葡萄糖标准溶液，0.5%羧甲基纤维素钠底物溶液，0.5%微晶纤维素底物溶液，0.5%水杨苷底物溶液。

1.2 方法

1.2.1 鲜瘤胃液的采集以玉米秸秆为粗料预饲东北农业大学实验基地的4头已装置永久瘤胃瘘管的奶牛，预饲期为 2周。 晨饲（06∶00）后 2 h，于 4头瘘管牛瘤胃内上下左右不同位点采集足量瘤胃液，混合并用两层纱布过滤，灌入经预热达39℃并通有CO2的保温瓶中，立即盖严瓶口，迅速返回试验室。……