北京协和医学院、中国医学科学院放射医学研究所天津市分子核医学重点实验室（天津300192）吴红英 王月英 张 恒 李德冠 王小春 李 进 杜利清 王 彦 褚丽萍 孟爱民

恶性肿瘤的治疗主要包括手术及放、化疗，而放、化疗主要副作用是抑制免疫及造血功能。17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯（E838）是一种新型辐射防护剂。药效学研究表明，E838小鼠的肝癌、肺癌等有明显的抑制作用［1］。本实验按照国家一类新药报批要求［2］，通过建立人EC901食管癌荷瘤小鼠模型，探讨单独使用E838及联合5－氟尿嘧啶药物对食管癌是否具有抑瘤增效作用，为其用于治疗肿瘤的研究提供实验依据。

材料与方法

1 实验材料

1.1 动物和瘤株：裸鼠20只，8～12周龄，雄性，体重20～22g，由中国医学科学院动物所提供，许可证号：SCXK（2009－0004），EC901食管癌瘤株由天津医科大学提供。

1.2 药物：5－氟尿嘧啶注射液（5－Fu），由天津金耀氨基酸有限公司生产（批号为0904171），将5－Fu用生理盐水配制成25mg／kg，E838制成7.5mg／kg。

1.3 仪 器：LM2235，Leica切 片 机 （德 国），BX51，奥林巴斯显微镜（BX51日本），Sysmex poch－100i全自动血液分析仪（日本）。

2 实验方法

2.1 EC901荷瘤小鼠模型的建立：用生理盐水调整细胞数为1×107，取0.1ml接种于每只小鼠右侧腋窝下。

2.2 分组及给药：小鼠接种瘤细胞3d后，将其随机分为对照组、5－Fu组、E838组、E838联合5－Fu组，每组5只。E838组、E838联合5－Fu组腹腔注射E838 0.2ml／只，1次／d，连续9d，5－Fu组及E838联合5－Fu组，隔日1次腹腔注射5－Fu，0.2ml／只，共4次。

2.3 抑瘤率计算于实验第12天，将各组小鼠眼球采血，检测血常规，处死小鼠后，剥取肿瘤组织称重，计算抑瘤率。抑瘤率（%）＝（1－治疗组平均瘤质量／对照组平均瘤质量）×100%。另取小鼠一侧股骨，冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞，用全自动血液分析仪计数骨髓有核细胞数。

2.4 病理学观察：取小鼠瘤组织，常规固定、脱水、石蜡包埋，切片。切片HE染色后用中性树脂封片，用正置显微镜进行组织学观察并采集图像。

3 统计学处理 结果用均数±标准差表示，两组数据间用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 E838联合化疗对食管癌EC901抑瘤率的影响 E838组、5－Fu组及E838联合5－Fu组对食管癌EC901的生长均有抑制作用，抑瘤率分别为63.23%、56.32%和73.56%，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01），E838联合5－Fu组可显著提高抑瘤作用，见表1。

表1 E838联合化疗对小鼠食管癌的抑制作用（¯x±SD）

2 E838联合化疗对小鼠造血功能的影响 E838组、5－Fu组及E838联合5－Fu组的骨髓细胞数均高于对照组，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），WBC、RBC、HGB数量均高于对照组，但与对照组比较差异无统计学意义，见表2。

表2 E838联合化疗荷瘤鼠外周血常规的影响（¯x±SD）

3 病理学检测 HE染色结果显示，对照组肿瘤形态不一，无包膜，与正常组织细胞无明显界限，呈浸润性生长。肿瘤细胞强嗜碱性蓝染，呈典型的恶性特征，核浆比值增大，核异型明显，中－低分化，见核分裂相，核仁可见（图1）。17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯组肿瘤形态基本呈球形，肿瘤细胞呈索状排列，瘤内有片状坏死，存在组织细胞肌化，肿瘤无包膜，与正常组织细胞界限明显。核浆比值增大核分裂相少见，核仁少见（图2）。E838联合5－Fu组肿瘤形态不规则，肿瘤细胞异型性明显，有包膜。肿瘤细胞蓝染，瘤细胞大小形态不规则，有片状坏死，核分裂相少见，核仁不明显（图3）。5－Fu组肿瘤形态规则，肿瘤细胞呈索状排列，瘤内有脂性空泡，与周围组织边界明显。肿瘤细胞强嗜碱性蓝染，瘤细胞大小形态较规则，核分裂像少见，偶见巨细胞（图4）。

图1 对照组

图2 药物组

图3 药物联合化疗组

图4 化疗组

讨 论

化疗是肿瘤治疗的主要手段之一，但由化疗药物带来的毒副作用如骨髓抑制、胃肠道反应、免疫功能下降等，限制了化疗药物疗效的进一步提高，如何降低化疗药物的毒、副反应，提高肿瘤患者的免疫功能［3，4］，并能增加肿瘤对化疗药物的敏感性，使用较低剂量的化疗药物也能充分发挥治疗作用，日益成为国内外专家学者努力的方向。近年来我们应用17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯（E838）进行的药效学实验研究已证实：E838能显著提高受照射小鼠30d存活率和保护指数［5～7］，具有提升白细胞的作用，毒副作用小。本实验利用荷瘤裸鼠肿瘤模型，观察17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯单独用药及联合化疗药物的抑瘤增效作用证明，E838能明显抑制荷瘤小鼠EC901食管癌的生长，当E838与化疗药合用时可增强抑瘤效果，其抑瘤率高于化疗药组和单独药物组，抑制率比治疗组升高28.13%、比化疗药组提高39.47%，提示E838联合5－Fu抗移植瘤生长具有一定增效作用。肿瘤患者的免疫功能不仅与肿瘤的发生和发展密切相关，而且对判断患者治疗效果和评估疾病预后有重要的参考价值。化疗药物可加重机体的免疫抑制，因此提高化疗后的免疫功能非常重要。本研究显示，E838能提高白细胞和骨髓有核细胞数量，说明E838除对肿瘤细胞的生长有抑制作用外，也有改善荷瘤小鼠造血功能的作用。这为E838在肿瘤化疗中的应用提供了一定的实验依据。

［1］ 吴红英，王月英，李德冠，等.E838联合γ射线对小鼠肝癌H22抑瘤作用的研究［J］.中国辐 射卫生，2008，17（4）：387－389.

［2］ 卫生部《新药（西药 ）临床前研究指导原则汇编（药学、药理学、毒理学 ）》.1993：137.

［3］ 李墨林，李传刚，舒晓宏，等.化疗治愈荷瘤小鼠模型的建立及氟尿嘧啶抑瘤作用的免疫机制［J］.细胞与分子免疫学杂志，2007，23（11）：1010－1013.

［4］ 于洪升，费从合，沈方臻，等.低剂量辐射联合环磷酰胺对肿瘤细胞凋亡、细胞周期以及骨髓增殖的影响的治疗研究［J］.中华放射医学与防护杂志，2004，24（2）：117－119.

［5］ 王月英 王汝勤 孟爱民，等.E838保护化疗小鼠造血功能的疗效观察［J］.陕西医学杂志，2009，38（11）：1443－1444.

［6］ 王月英，王汝勤 ，张良安，等.E838对IRM－2和ICR小鼠的辐射防护作用［J］.中国比较医学 杂志，2004，12（6）：332－335.

［7］ 王月英，王汝勤，赵忠萍.E838对小鼠辐射防护作用的观察［J］.中华放射医学与防护杂志，2005，24（1）：39－40.